[发明专利]一种抗病毒特异性T细胞的制备方法

说明书

本发明提供了一种用于培养抗病毒特异性T细胞的培养基，所述培养基中包括浓度1g/L并≦4g/L的氯化钾，优选为2g/L的X‑VIVO培养基、GT‑T551培养基、ALYS505N‑0培养基。基于前述培养基，本发明还提供了一种抗病毒特异性T细胞的培养方法，在特异性T细胞培养过程中，培养基中添加有浓度1g/L并≦4g/L的氯化钾。本发明提供的培养基和培养方法培养出的细胞产品中抗病毒特异性细胞比例更高，且成本低，操作简便，适于推广。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种抗病毒特异性T细胞的培养方法。

背景技术

病毒是一种个体微小，结构简单，只含一种核酸(DNA或RNA)，必须在活细胞内寄生并以复制方式增殖的非细胞型生物。病毒感染人类会引起多种健康问题，病毒感染一般症状主要有发热、头痛、咳嗽等全身中毒症状及病毒寄主和侵袭组织器官导致炎症损伤而引起的局部症状(腹泻、皮疹、肝脏功能损伤等)。根据病毒的不同产生症状不同，有些病毒还会使心肌受到损伤，引起病毒性心肌炎。

抗病毒免疫就是机体针对病毒的免疫。包含细胞免疫、体液免疫等机体免疫模式。能够有效的对抗、遏制、消除病毒对机体的感染和破坏。是机体适应自然环境的重要保证。抗病毒特异性T细胞通过细胞免疫完成对病毒的清除作用。

抗病毒特异性T淋巴细胞是T细胞的一个亚群，经抗原刺激和细胞因子的辅助下增殖分化，活化成为具有特异杀伤活性的T细胞。目前的抗病毒治疗中，可以通过向病毒感染患者转输具有抗病毒活性的免疫细胞，直接清除病毒或激发机体免疫反应来清除病毒，达到治疗目的。而实现该种疗法的前提是体外培养获得大量抗病毒特异性T细胞。

特异性T细胞的培养基成分对培养效果的影响目前还有待深入研究。

中国专利201810955224.6中公开了一种免疫细胞培养基及其应用，对无水氯化钙等多种无机盐、L-亮氨酸等多种氨基酸、白介素2、白介素4等组分对免疫细胞培养的影响进行了探索。但该发明提供的培养基成分种类复杂多变，成分浓度范围较大，无法确定最佳培养效果的培养基的具体成分浓度，在培养的选择中带来了较大难度。

一般特异性T细胞或免疫细胞培养基中的氯化钾常规浓度较低(中国专利201810955224.6：310.5mg/L～311.3mg/L；中国专利201711319524.7：10-1000mg/L；中国专利201711321217.2：10-1000mg/L；中国专利201710797665.3：250-500mg/L)，本领域常规使用的最高氯化钾浓度为1g/L，本发明通过优化培养基中氯化钾的浓度提高了细胞培养终产物中抗病毒特异性T细胞的比例。

发明内容

本发明提供了一种用于培养抗病毒特异性T细胞的培养基和培养方法。常规抗病毒特异性T细胞的培养基中氯化钾含量最高为1g/L，本发明意外发现了含高浓度氯化钾的培养基所培养的细胞产物中，抗病毒特异性细胞比例更高。

一方面，本发明提供了一种用于抗病毒特异性T细胞培养的培养基。

所述的抗病毒特异性T细胞培养基中包括氯化钾的浓度为1g/L并≦4g/L。

优选地，所述的抗病毒特异性T细胞培养基中包括浓度为2g/L的氯化钾。

所述的抗病毒特异性T细胞培养基的类型包括但不限于无血清培养基；所述的培养基包括但不限于KBM581培养基、GT-T551培养基、X-VIVO培养基、GT-T505培养基、StemXVivo培养基、TexMACS GMP培养基、EX-CELL培养基、ImmunoCult培养基或ALYS505N-0培养基。

所述的培养基的成分包括但不限于：无水氯化钙、硫辛酸、丙酮酸钠、氯化镁、维生素、乙醇胺、氯化钠、烟酰胺、氨基酸、抗生素。

在一些实施例中，所述的培养基为添加有2g/L的氯化钾的X-VIVO培养基。