[发明专利]表皮干细胞向胰腺细胞分化的改进方法有效
| 申请号： | 202010792168.6 | 申请日： | 2018-09-03 |
| 公开（公告）号： | CN111848744B | 公开（公告）日： | 2021-07-23 |
| 发明（设计）人： | 杨骏;张勇 | 申请（专利权）人： | 宁波希诺赛生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/00 | 分类号： | C07K14/00;C12N5/071;C12N5/074 |
| 代理公司： | 北京棘龙知识产权代理有限公司 11740 | 代理人： | 谢静 |
| 地址： | 315000 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表皮 干细胞 胰腺 细胞 分化 改进 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种活性刺激肽，其序列如SEQ ID NO：4所示。
2.权利要求1所述的活性刺激肽在用于促进表皮干细胞向胰腺细胞分化中的应用。
3.一种表皮干细胞向胰腺细胞分化的方法，具体包括以下步骤：
第一步，将表皮干细胞放至1％Matrigel铺被的培养皿中按照如下方法用活性刺激肽诱导：
两小时后，表皮干细胞开始铺展，此时将培养基换为含有10％胎牛血清和100ng/mlactivin A的DMEM培养基中培养24小时，然后表皮干细胞转为用含10％胎牛血清以及1-10mg/L如权利要求1所述的活性刺激肽的DMEM培养6-8小时使表皮干细胞分化，之后，分化表皮干细胞接着用含有10％胎牛血清和1×10-6mol/L RA的 DMEM培养基继续诱导24小时，得到胰腺前体细胞；
第二步，胰岛前体细胞的扩增；
分化的表皮干细胞用含有10％胎牛血清和8-12ng/ml bFGF的DMEM培养3- 5天，诱导来源于表皮干细胞的胰腺前体细胞的扩增，在此期间，大部分贴壁的细胞呈现上皮样结构；
第三步，胰腺β细胞(Pancreatic βcell)的成熟。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述bFGF的浓度为10ng/ml。
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