[发明专利]一种新型隐球菌几丁质脱乙酰酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种新型隐球菌几丁质脱乙酰酶，其特征在于：所述新型隐球菌几丁质脱乙酰酶的氨基酸序列选自以下其中一种：

(1)如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

(2)对SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列进行一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加修饰且具有相同功能的氨基酸序列；

(3)与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有80％以上同源性且具有相同功能的氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的一种新型隐球菌几丁质脱乙酰酶，其特征在于：所述新型隐球菌几丁质脱乙酰酶的氨基酸序列选自与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有90％以上同源性且具有相同功能的氨基酸序列；更优选地，具有95％以上的同源性。

3.一种新型隐球菌几丁质脱乙酰酶基因，其特征在于：编码权利要求1所述的新型隐球菌几丁质脱乙酰酶。

4.如权利要求3所述的一种新型隐球菌几丁质脱乙酰酶基因，其特征在于：该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

5.一种重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体包含权利要求3或4所述的新型隐球菌几丁质脱乙酰酶基因。

6.如权利要求5所述的重组表达载体，其特征在于：所述表达载体为pGBG1，表达载体pGBG1通过如下方式获得：

将表达载体pPIC9中如SEQ ID NO.4所示的信号肽序列进行密码子优化，获得适合在毕赤酵母中表达的信号肽序列如SEQ ID NO.5所示；

利用Nsi I/Xho I双酶切，将表达载体pPIC9中如SEQ ID NO.4所示的序列替换为如SEQID NO.5所示的信号肽序列，得到表达载体pGBG1。

7.权利要求1所述的新型隐球菌几丁质脱乙酰酶的制备方法，该方法为：将权利要求3或4所述的新型隐球菌几丁质脱乙酰酶基因构建至表达载体中，然后导入毕赤酵母细胞，诱导并获得分泌表达的几丁质脱乙酰酶。

8.如权利要求7所述的新型隐球菌几丁质脱乙酰酶的制备方法，其特征在于：所述毕赤酵母为GS115。

9.如权利要求7所述的新型隐球菌几丁质脱乙酰酶的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)将核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的新型隐球菌几丁质脱乙酰酶壳聚糖酶基因进行全合成并构建至表达载体pGBG1中；

(2)对前述构建的表达载体pGBG1进行酶切线性化后，舍弃含有抗性基因的片段，回收含有几丁质脱乙酰酶基因的片段；

(3)将获得的含有几丁质脱乙酰酶基因的表达载体导入毕赤酵母细胞GS115中，诱导培养，获得分泌表达的几丁质脱乙酰酶。

10.权利要求1所述的新型隐球菌几丁质脱乙酰酶在几丁质、壳聚糖或壳寡糖脱乙酰中的应用。