[发明专利]一种高效检测猪圆环病毒2型的引物以及试剂盒

说明书

本发明公开一种高效检测猪圆环病毒2型的引物及试剂盒，发明以改良后的LAMP技术为基因扩增反应原理，在反应体系里加入金纳米颗粒，吸附ssDNA和蛋白酶，抑制升温过程中的非特异性反应，达到热启动的目的，避免在升温过程中的非特异性反应；结合改良后的LAMP技术与微流控芯片技术，即可以快速给出准确的检测结果，又达到同一样品多个不同指标联检的目的，同时，反应试剂预埋于微流控芯片上，用户只需加入样品，操作简便。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种高效检测猪圆环病毒2型的引物以及试剂盒。

背景技术

猪圆环病毒分为1型和2型。还没有证据表明猪圆环病毒1型可以导致猪发病，但其在PK-15细胞中的广泛污染和在猪群中的高感染率已经引起了人们的高度关注，而猪圆环病毒2型的危害在于能够使感染猪只的免疫功能受到损害，这种可导致机体免疫抑制的病毒，由于经常以亚临床感染的形式出现，常易被忽视。为了更好地控制猪圆环病毒的感染，迫切需要寻找一种适合的快速准确的诊断方法。

该病毒的检测如果采用现有的PCR技术，由于其反应要在2个不同的温度区循环，对仪器要求高，成本也相对高昂，并且PCR技术仅仅1对扩增引物，易受干扰，特异性相对不足，且出结果时间较久，操作专业要求高，微量加量步骤多。而LAMP技术共有4条不同的特异性引物，故而检测结果准确度更高，但是由于是恒温反应，缺少类似PCR的热启动酶，在设备升温阶段容易产生非特异性扩增从而影响检测结果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的缺陷提供一种高效检测猪圆环病毒2型的引物及试剂盒。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种高效检测猪圆环病毒2型的引物，具体为：

PCV22-F3-8: ATTACTTCCAACCAAACAACA；

PCV22-B3-8: GGTTAAGTGGGGGGTCTT；

PCV22-FIP-8:CGAGGCCTACGTGGTCTACA-AAAGAAATCAGCTGTGGCT；

PCV22-BIP-8:ACTGCGTTCGAAAACAGTATATACG-TCTGAATTGTACATACATGGTTAC。

本发明提供一种高效检测猪圆环病毒2型的试剂盒，所述试剂盒包括上述引物以及反应液，所述反应液的组成为：

20mM Tris-HCl 0.18μL；

10mM KCl 6.8μL；

10mM （NH₄）₂SO₄ 1.8μL；

8mM MgSO₄ 1.8μL；

0.1% Tween-20 1.8μL；

1.4mM dNTPs 0.9μL；

800U/mL Bst酶 1.8μL；

50uM SYBRGREEN荧光染料 0.9μL；

4.0x10^-6 mol/L 金纳米颗粒 1.8μL；

水 0.22μL。