[发明专利]一种检测早期老年痴呆症的胶体金试纸条及其制备方法

说明书

本发明涉及一种检测早期老年痴呆症的胶体金试纸条及其制备方法。所述试纸条包括背衬，所述背衬上依次为以下结构：样品垫、金标垫、醋酸纤维素膜和吸水垫；所述样品垫压设在金标垫上1～3mm；所述金标垫和吸水垫分别压设在醋酸纤维素膜两端上1～3mm；所述醋酸纤维素膜上设置有质控线和检测线；所述金标垫上包被有胶体金标记的APOE4点突变单克隆抗体；所述质控线上包被有羊抗鼠IgG，所述检测线上包被有Pan APOE单克隆抗体；其中APOE4点突变单克隆抗体重链氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。本发明所提供的胶体金试纸条，采用筛选得到的特异性强、灵敏度高的APOE4点突变单克隆抗体，检测准确，适宜进行扩大化生产并用于临床诊断早期老年痴呆症。

技术领域

本发明涉及一种检测试剂盒试纸条，具体涉及一种检测早期老年痴呆症的胶体金试剂盒试纸条及其使用方法。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)，又名老年痴呆症，是一种年龄相关的神经退行性疾病，其主要临床表现为记忆功能障碍和行为方面的改变。随着人口老龄化的加剧，中国AD患者数目急剧增加，到2015年已达950万，成为全球痴呆症患者人数最多的地区，给社会和家庭带来巨大的负担。

作为一种进行性的疾病，AD最重要的生理特征是大脑部分区域经历进行性功能障碍、神经元损失和突触的丧失。Bateman等的研究证明，在AD发作前10至20年患者大脑就开始逐渐产生变化。而这些功能性的变化往往难以逆转，这也导致了目前AD治疗的困境。因此，对早期AD的检测可能是预防与治疗AD最有效的手段。

血液生物标记物的检测因其便宜、易于操作以及非侵入性的优势成为众多疾病检测的首选方式。而在AD中，众多蛋白被证明在AD患者血浆中有明显变化，如BDNF,AGT,IGFBP-2,OPN等，提示血浆蛋白质含量检测可能是AD早期诊断有价值的方式。

而载脂蛋白E(ApoE)被证明与AD发生相关。载脂蛋白(Apo)E基因分为三种等位基因型ε2、ε3、ε4，分别编码ApoE2、ApoE3和ApoE4三种异构体。三种不同亚型ApoE之间的区别仅在于其一级结构112与158位点的氨基酸不同，即ApoE2(112Cys,158Cys)、ApoE3(112Cys,158Arg)、ApoE4(112Arg,158Arg)。其中，ApoEε4基因高表达已被公认为是AD最大的危险因素之一。1990年Duke大学对占发病大部分的散发性AD(SAD)和迟发家族性AD(FAD)做免疫组化分析发现:老年斑和神经纤维缠结中存在ApoE4。研究证明,散发性和家族性晚发AD均与ε4有关。临床发现杂合子ε4携带者患晚发AD的机率比非携带者高3倍、纯合子ε4携带者患AD的机率比非携带者高10-20倍。carwfodr等发现ε4基因与患者年龄、发病年龄有相关性。而在早期诊断中，若个体携带ApoE4,则给AD的诊断增加至少5％～10％的置信度,尤其对于不同痴呆类型的鉴别诊断。同时若患者具备AD相关行为表型，且携带ApoE4,则诊断AD的准确性可达94％～98％。这些均提示：ApoE4基因型的检测可能是早期AD诊断最有价值的指标之一。

但是，目前国内外对ApoE基因型的检测主要通过第二代高通量测序系统，成本高昂的同时，准确性亦难得到保证。据2015年底全国性肿瘤二代测序实验室质量评估报告结果显示，55％的实验室测序结果不合格，22％的实验室质量评估为0分。这些导致ApoE4基因型检测在AD诊断中难以被推广使用。