[发明专利]一种糖尿病视网膜病变检测生物标记物、检测试剂盒及应用

说明书

本发明属于生物医学检测技术领域，尤其涉及一种糖尿病视网膜病变检测生物标记物、检测试剂盒及应用。本发明利用实时荧光定量PCR技术，通过检测血清中LncRNA AQP4‑AS1的相对含量，为糖尿病视网膜病变提供了新的检测标记物和预后评估方法，本发明提供的试剂盒具有创伤性小和操作简单等特点。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，尤其涉及一种糖尿病视网膜病变检测生物标记物、检测试剂盒及应用。

背景技术

糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病常见的并发症之一，也是主要的致盲性眼病之一，其发病率逐年增长，现已成为全球公共卫生问题和社会经济负担。DR发病早期即出现视网膜血管损伤，表现为血视网膜屏障破坏、血管通透性增加、内皮细胞增生、周细胞丢失、基底膜增厚和新生血管的形成。病程后期可出现玻璃体积血、黄斑缺血水肿、视网膜脱离等并发症，从而造成视功能严重受损。

目前，糖尿病视网膜病变的治疗方式主要是激光、药物和手术三大类。激光治疗包括全视网膜光凝、局部光凝和格栅光凝。局部药物干预手段包括糖皮质激素治疗和玻璃体腔注射抗血管内皮生长因子；手术治疗主要为玻璃体切割法。然而，目前这些方法都无法从根本上解决微血管无灌注和缺血缺氧等问题，并且具有治疗的局限性和副作用。因此，针对糖尿病视网膜病变的诊断和干预，找到灵敏且应用方便的检测标记物，具有十分重要的临床意义。

长链非编码RNA(LncRNA)是一类长度超过200nt的RNA分子，可以在多种层面调控基因的表达，如表观遗传调控、转录调控和转录后调控。LncRNA参与基因组印记、染色体修饰、转录激活、转录干扰和核内转运等多种重要的生理过程。已有大量研究证明，LncRNAs在人类多种疾病中发挥重要的调控作用，包括眼科疾病、心血管疾病、神经退行性疾病和癌症等。鉴于IncRNA的特征和疾病相关性，其有望成为诊断的标志物和预后评估的标记。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种糖尿病视网膜病变检测生物标记物、检测试剂盒及应用，公开了LncRNA AQP4-AS1在正常人和糖尿病视网膜病变患者血清中的表达情况，包括实时荧光定量PCR检测LncRNA AQP4-AS1的方法，为糖尿病视网膜病变的诊断和预后评估提供了生物学基础，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。

本发明是这样实现的，一种基于实时荧光定量PCR技术检测糖尿病视网膜病变的生物标记物，所述标记物为LncRNA AQP4-AS1，核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

进一步地，所述标记物的检测引物如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

一种糖尿病视网膜病变实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于：包括PCR扩增体系，所述PCR扩增体系包括SYBR Premix Ex Taq 2×(包括Ex Taq酶，dNTP Mixture，Mg2+，Tli RNaseH，TB Green)100μL，AQP4-AS1特异性的qRT-PCR上游引物，1管，10μM，100μL/管，AQP4-AS1特异性的qRT-PCR下游引物，1管，10μM，100μL/管，GAPDH定量PCR上游引物，1管，10μM，100μL/管，GAPDH定量PCR下游引物，1管，10μM，100μL/管。

进一步地，所述AQP4-AS1特异性的qRT-PCR上游引物如SEQ ID NO:4所示，下游引物如SEQ ID NO:5所示；GAPDH定量PCR上游引物序列如SEQ ID NO:2所示，下游引物序列如SEQ ID NO:3所示。RNA反转录随机引物为GAPDH定量PCR引物序列。

进一步地，所述试剂盒还包括反转录反应体系，所述反转录反应体系包括总RNA反转录引物(包括Oligo dT和Random 6mers)，1管，浓度：50μM，50μL/管，反转录酶(200U/μL)50μL，dNTP Mixture(10mM each)50μL，反转录buffer 50μL。