[发明专利]一种用于分析与发掘消化道益生菌产生的功能性代谢物的方法

权利要求书

1.一种用于分析与发掘消化道益生菌产生的功能代谢物的方法，其特征在于，所述方法联合运用完全合成培养基的体外培养方法与比较代谢组学方法进行研究与分析，具体地，所述方法包括如下步骤：

(1)复苏益生菌，富集培养益生菌，并传代培养于完全合成培养基；

(2)取益生菌菌液，将菌液重悬于完全合成培养基，作为接种物备用；

(3)将步骤(2)接种物接种于添加胆盐溶液的完全合成培养基，培养，采集样品；

(4)提取益生菌发酵液中的代谢物；

(5)利用比较代谢组学方法分析步骤(4)的代谢物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)的完全合成培养基中的胆盐溶液的组分包含甘胆酸钠、甘氨鹅脱氧胆酸钠、牛胆酸钠、牛磺鹅去氧胆酸钠。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述胆盐溶液的配制方法为：称取甘氨酸钠0.1-0.4g、甘氨鹅脱氧胆酸钠0.1-0.4g、牛胆酸钠0.02-0.06g、牛磺鹅去氧胆酸钠0.02-0.06g，使用磷酸缓冲液溶解并准确定容至10mL，过滤灭菌；

优选地，称取甘胆酸钠0.22g、甘氨鹅脱氧胆酸钠0.20g、牛胆酸钠0.04g、牛磺鹅去氧胆酸钠0.04g。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述胆盐溶液在完全合成培养基中添加量为0.2-0.8g/L，优选为0.5g/L。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述完全合成培养基中包含氨基酸组分，氨基酸组分包含：天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、甘氨酸、苏氨酸、瓜氨酸、精氨酸、牛磺酸、丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、鸟氨酸盐酸盐、赖氨酸、脯氨酸、半胱氨酸。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述完全合成培养基中氨基酸各组分含量为：

优选地，所述完全合成培养基中氨基酸各组分含量为：

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，所述完全合成培养基中每升培养基还包含：葡萄糖5-20g、乳酸钠2.0-3.0g、氯化钾0.5-0.7g、氯化钠0.5-0.7g、磷酸氢二钾0.9-1.1g、磷酸二氢钾4.5-5.5g、氯化钙0.1-0.2g、七水合硫酸镁0.45-0.55g、乙酸钠0.9-1.1g、柠檬酸铵0.5-0.7g、抗坏血酸0.4-0.6g、腺嘌呤0.01-0.02g、鸟嘌呤0.01-0.02g、肌苷0.005-0.01g、乳清酸0.005-0.01g、胸苷0.005-0.01g、尿嘧啶0.005-0.015g、黄嘌呤0.005-0.15g、9-11mL血红素溶液(0.01％,w/v)、9-11mL脂肪酸溶液、9-11mL还原剂溶液、9-11mL微量元素溶液、9-11mL维生素母液、45-55mL碳酸氢钠溶液及0.9-1.1mL刃天青溶液(1％,w/v)；

优选地，所述完全合成培养基中每升培养基还包含：葡萄糖10g、乳酸钠2.7g、氯化钾0.6g、氯化钠0.6g、磷酸氢二钾1g、磷酸二氢钾5g、氯化钙0.15g、七水合硫酸镁0.5g、乙酸钠1g、柠檬酸铵0.6g、抗坏血酸0.5g、腺嘌呤0.01g、鸟嘌呤0.01g、肌苷0.005g、乳清酸0.005g、胸苷0.005g、尿嘧啶0.01g、黄嘌呤0.01g、10mL血红素溶液(0.01％,w/v)、10mL脂肪酸溶液、10mL还原剂溶液、10mL微量元素溶液、10mL维生素母液、50mL碳酸氢钠溶液及1mL刃天青溶液(1％,w/v)。