[发明专利]一种NT-proBNP重组蛋白的保存液及其制备方法

说明书

本发明公开了一种NT‑proBNP重组蛋白的保存液及其制备方法，所述保存液以质量分数计包括5％～20％胎牛血清、1％～5％PVP10000、1％～10％乙二醇、1％～3％普鲁兰多糖、0.1％～0.5％还原型谷胱甘肽、0.1％～1％BSA、0.02％～0.06％防腐剂、pH7～8的PBS缓冲液。该保存液使得NT‑proBNP重组蛋白生物活性能在37℃稳定7天，2～8℃稳定100天，‑20℃稳定150天，生物活性没有降解，仍然维持在原水平。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种NT-proBNP重组蛋白的保存液及其制备方法。

背景技术

1988年，日本学者首次从猪脑内分离得到一种具有强力的利钠、利尿、扩血管和降压作用的多肽，命名为脑钠肽或称钠尿肽(Brain Natriuretic Peptide，BNP)。当心肌细胞受刺激后，会产生含134个氨基酸的B型利钠肽原前体(pre-proBNP)，随后在相关酶的作用下切掉N端的信号肽序列，形成含108个氨基酸的BNP前体(proBNP)，后者在内切酶的作用下裂解为含有76个氨基酸、无生物活性的N端产物--N末端B型脑利钠肽前体(NT-proBNP)和含有32个氨基酸、有活性的C端产物--B型利钠肽(BNP)。美国在2004年和2008年分别发表了BNP临床应用专家共识和国际NT-proBNP专家共识，系统阐述了BNP和NT-proBNP的生物学和临床应用，已经被各级医院和医师广泛用于临床实践，成为心血管病尤其是心力衰竭诊断和评估十分有用的生物标志物。

但BNP半衰期短(22min)，体外稳定性差，而NT-proBNP半衰期相对较长(120min)，体外稳定性相对更强，在心力衰竭患者中的浓度也较BNP高，在有些情况下更有利于心力衰竭的诊断。天然的NT-proBNP具有76个氨基酸，分子量小，原核重组表达的蛋白缺乏糖基化，其稳定性较天然蛋白更差。因此，NT-proBNP试剂盒开发和使用过程中，对校准品的稳定性要求较高。

因此，如何开发一种稳定保护NT-proBNP，防止其发生降解的稀释液，使得NT-proBNP重组蛋白的保存时间长，成为亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明目的是提供一种NT-proBNP重组蛋白的保存液及其制备方法，可延长NT-proBNP重组蛋白的保存时间，该保存液使得NT-proBNP重组蛋白生物活性能在37℃稳定7天，2～8℃稳定100天，-20℃稳定150天，生物活性没有降解，仍然维持在原水平。

为了实现上述目的，本发明提供了一种NT-proBNP重组蛋白的保存液，所述保存液以质量分数计包括5％～20％胎牛血清、1％～5％PVP10000、1％～10％乙二醇、1％～3％普鲁兰多糖、0.1％～0.5％还原型谷胱甘肽、0.1％～1％BSA、0.02％～0.06％防腐剂、pH7～8的PBS缓冲液。

进一步地，所述BSA的质量分数为0.1％。

进一步地，所述PBS缓冲液的pH为7.4。

进一步地，所述普鲁兰多糖的质量分数为2％。

进一步地，所述保存液以质量分数计包括5％胎牛血清、2.5％PVP10000、5％乙二醇、2％普鲁兰多糖、0.25％还原型谷胱甘肽、0.1％BSA、0.05％防腐剂、pH7.4的PBS缓冲液。

进一步地，所述保存液以质量分数计包括5％胎牛血清、5％PVP10000、5％乙二醇、2％普鲁兰多糖、0.1％还原型谷胱甘肽、0.1％BSA、0.05％防腐剂、pH7.4的PBS缓冲液。

进一步地，述保存液以质量分数计包括10％胎牛血清、5％PVP10000、1％乙二醇、2％普鲁兰多糖、0.5％还原型谷胱甘肽、0.1％BSA、0.05％防腐剂、pH7.4的PBS缓冲液。

进一步地，所述防腐剂包括Proclin300、叠氮钠中的至少一种。