[发明专利]一种间充质干细胞在脱细胞异体真皮支架上的培养方法及其应用

说明书

本发明提供了一种间充质干细胞在脱细胞异体真皮支架上的培养方法及其应用，该培养方法包括以下步骤：S1：间充质干细胞悬液的制备：将间充质干细胞传代培养至细胞90％汇合时，收集P3代细胞，制成间充质干细胞悬液；S2：附着：将脱细胞异体真皮支架与间充质干细胞悬液放置于超低吸附反应皿中使用完全培养基进行培养，先在37℃条件下震荡培养，再静置培养2‑3天，培养条件如下：温度为37.0±0.5℃、CO2浓度为5.0±0.2％，湿度为饱和湿度；本发明的方法制备的人工皮肤进一步减少创面的深度，提供相对满意的愈合效果。

技术领域

本发明属于生物组织器官修复技术领域，具体涉及一种间充质干细胞在脱细胞异体真皮支架上的培养方法及其应用。

背景技术

正常的皮肤分为三层，角质层、真皮层和皮下组织层，真皮层含有丰富的神经和血管等，成年哺乳动物的真皮不能自发地再生，在缺少移植存活的真皮基质时，成纤维细胞便开始合成不成熟的基质，基质经重塑形成疤痕，部分疤痕收缩皮肤引起疼痛，部分还会影响相近关节活动，对患者的身心健康都有长期影响；市面上已有的脱细胞真皮基质是异体真皮经特殊处理，去除其细胞成分后得到的一种真皮替代品，异体移植最大的问题就是排异反应，而移植皮肤造成排异反应的主要是表皮细胞、真皮中的成纤维细胞和内皮细胞等细胞成分；而非细胞成分的细胞外基质蛋白和胶原(即脱细胞真皮)则无任何免疫活动，可永久地存在异体宿主体内，有效地改善瘢痕形成的皮肤收缩的情况。

慢性创面的原因有很多，除了感染及常见的系统性疾病(如糖尿病)，大面积皮肤缺损也是慢性难愈性创面的主要原因，慢性创面治疗时间长，除了给患者造成了躯体及经济上的负担之外，还严重影响到了患者的社会心理健康，因此慢性创面是整形外科乃至整个医学界的难题；目前临床上的常用的修复方法，需要对供区造成损伤，若受区损伤面积较大，则供区可能面临较大损伤和再次出现愈合不良的风险，近些年来，促进慢性创面的研究有了一定的突破，其中干细胞为解决这一难题提供了新的思路。

脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)是一种来源于中胚层的MSCs，可跨胚层多向分化，同时具有自分泌及旁分泌功能，可以分泌多种细胞因子，减轻炎症反应，促进血管新生，与胚胎干细胞和BMSCs不同，ADSCs的获取途径广泛，且可通过局麻微创等方式获取，不涉及伦理问题；因此已经有研究表明ADSCs可以显著促进创面愈合，研究证实，ADSCs还有抗炎和抗纤维化作用，临床研究发现，ADSCs可显著提高难愈性皮肤溃疡、放射性皮炎、术后皮肤坏死等疾病的治疗效果；但是传统的细胞治疗方法是将ADSCs直接注射至创面组织，但是效果很难达到患者的需求，其可能的原因是由于创面组织处于慢性炎症状态，注射的ADSCs细胞受局部环境影响较大，存活率有限，从而很难发挥促进创面愈合的效应。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提供了一种间充质干细胞在脱细胞异体真皮支架上的培养方法。

本发明具体技术方案如下：

本发明提供了一种间充质干细胞在脱细胞异体真皮支架上的培养方法，培养方法具体包括以下步骤：

S1：间充质干细胞悬液的制备：将间充质干细胞传代培养至细胞70-90％汇合时，收集P3代细胞，制成间充质干细胞悬液；

S2：附着：将脱细胞异体真皮支架与间充质干细胞悬液放置于超低吸附反应皿中使用完全培养基进行培养，先在37℃条件下震荡培养，再静置培养2-3天，培养条件如下：温度为37.0±0.5℃、CO2浓度为5.0±0.2％，湿度为饱和湿度。

进一步地，该培养方法具体包括以下步骤：