[发明专利]一种香豆素类荧光探针及其制备方法与应用

说明书

本发明属于荧光分子探针领域，公开了一种香豆素类荧光探针及其制备方法与应用。本发明的制备方法包括以7‑羟基香豆素为原料合成中间体7‑羟基‑8‑香豆素醛，再以中间体7‑羟基‑8‑香豆素醛为原料合成第二中间产物8‑(苯并[d]噻唑‑2‑基)‑7‑羟基‑2H‑苯并吡喃‑2‑酮，再与2,4‑二硝基苯磺酰氯通过取代反应合成香豆素类荧光探针。本发明荧光探针对ONOO^‑有专一的选择性，可应用于过氧亚硝酸盐的体外荧光检测。

技术领域

本发明属于荧光分子探针领域，涉及一种香豆素类荧光探针及其制备方法与应用，特别是涉及一种检测过氧亚硝酸盐(ONOO-)的香豆素类荧光探针的制备方法及应用。

背景技术

过氧亚硝酸盐(ONOO^-)是生命系统中最重要的内源性活性氧(ROS)之一，在各种生理和病理过程(例如信号转导和抗菌活性)中起着至关重要的作用。但是，由于其强大的氧化和硝化能力，高水平的ONOO^-可能会损坏许多生物分子，包括脂质，DNA，蛋白质和酶，这可能进一步影响细胞过程，甚至引起细胞坏死和凋亡，最终导致各种疾病的出现，例如心血管疾病和损伤，自身免疫和炎性疾病，阿尔茨海默氏病，甚至癌症。即使这些是已知事实，由于其在体内的低浓度，高反应性和短寿命，其在生命系统中的许多方面仍不清楚。因此，开发快速，选择性，灵敏的生物体内ONOO^-检测方法，对进一步了解生物ONOO^-具有十分重要意义。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种香豆素类荧光探针及其制备方法与应用，该荧光探针合成简单，结构新颖，应用于体外检测ONOO^-，具有较好的选择性、灵敏性、抗干扰能力强等优点。

本发明提供了一种香豆素类荧光探针，其化学结构式如式(Ⅰ)所示：

本发明还提供了一种上述香豆素类荧光探针的制备方法，包括以下步骤：

S1.将7-羟基香豆素与六次甲基四胺，溶于乙酸溶剂，70～100℃温度条件下反应，反应结束后降温至70℃以下，加入盐酸调节体系pH值至2-5，乙酸乙酯萃取，乙醇重结晶得到如式(Ⅰ^’)所示结构的第一中间产物；

S2.将所述第一中间产物、2-氨基苯硫酚和偏亚硫酸钠溶解于N，N-二甲基甲酰胺溶剂，110～120℃温度条件下反应，反应结束后加水析出固体，过滤得到如式(Ⅱ)所示结构的第二中间产物；

S3.将所述第二中间产物、4-溴甲基苯硼酸频哪醇酯和碳酸钾溶于乙腈溶剂，在70～90℃反应，反应完毕后减压浓缩反应得到的产物，乙醇重结晶得到所述香豆素类荧光探针。

优选的，上述制备方法的步骤S1中，7-羟基香豆素与六次甲基四胺的摩尔比为1：(0.55～0.7)。

优选的，上述制备方法的步骤S1中，所述反应的时间为6～8h。

优选的，上述制备方法的步骤S2中，所述第一中间产物、2-氨基苯硫酚和偏亚硫酸钠的摩尔比为1：(1～1.2)：(0.86～1)。

优选的，上述制备方法的步骤S2中，所述反应的反应时间为1～3h。

优选的，上述制备方法的步骤S3中，第二中间产物、4-溴甲基苯硼酸频哪醇酯以及碳酸钾的摩尔比为1:(1～1.5)：(2.5～3.5)。

优选的，上述制备方法的步骤S3中，所述反应的反应时间为20～24h。

本发明还提供了一种上述香豆素类荧光探针或上述制备方法得到的香豆素类荧光探针在过氧亚硝酸盐的体外荧光检测中的应用。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：