[发明专利]一种氯吡格雷用药检测试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种氯吡格雷用药检测试剂盒，所述试剂盒包括PCR反应液、荧光探针和检测引物；所述检测引物包括基于CYP2C19基因的rs12248560位点、基于CYP2C19基因的rs11249454位点、基于CYP2C19基因的rs4986893位点、PON1基因的rs662位点和ABCB1基因的rs4148727位点的引物；所述检测引物的基因序列为SEQ ID NO 1～SEQ ID NO 10。本发明还提供了上述试剂盒的应用。本发明检测灵敏度高，检测精度能够达到98％以上。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种氯吡格雷用药检测试剂盒及应用。

背景技术

氯吡格雷是治疗急性冠状动脉综合征和经皮冠状动脉介入术后抗栓的基础药物，但4％～30％患者在治疗期间出现氯吡格雷疗效下降，甚至出现氯吡格雷抵抗。氯吡格雷为前体药，主要依赖于CYP2C19代谢生成活性代谢产物，发挥抗血小板疗效。CYP2C19基因存在多态性，其酶有四种不同的代谢类型：快代谢型(RM，*1/*1)；超快代谢型(UM，*17/*17)；中间代谢型(IM，*1/*2，*1/*3，*17/*2，*17/*3)；慢代谢型(PM，*2/*2，*2/*3，*3/*3)。中国人群中14％为CYP2C19慢代谢型，常规剂量的氯吡格雷在慢代谢型患者中产生的活性代谢物减少，抑制血小板聚集作用下降，形成血栓风险增加；而在超快代谢型患者中产生活性代谢产物增加，抑制血小板聚集作用增强，出血风险增加。

临床研究证实，CYP2C19基因的*2、*3、*17位点多态性影响氯吡格雷的代谢速率，从而影响药物的疗效。2012年，中国国家食品药品监督管理局(CFDA)在氯吡格雷说明书中增添了药物基因组学意见，指出CYP2C19慢代谢情况与氯吡格雷的作用降低相关。美国FDA、欧盟药品局(EMA)、日本药品与医疗器械管理局(PDMA)、加拿大健康局(HCSC)强调CYP2C19慢代谢者使用氯吡格雷的疗效降低，发生副作用的风险增加。2015年，国家卫计委个体化医学检测技术专家委员会发布《药物代谢酶和药物作用靶点基因检测技术指南(试行)》，肯定了CYP2C19基因检测在氯吡格雷个体化用药中作用。

然而现有的检测试剂盒和检测方法检测准确度有限，而且操作复杂，极易造成假阳性，检测灵敏度也不高。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的至少一种问题，提供一种氯吡格雷用药检测试剂盒及应用，检测灵敏度高，检测准确度能达到98％以上。

为解决上述问题，本发明的技术方案如下：

本发明保护一种氯吡格雷用药检测试剂盒，所述试剂盒包括PCR反应液、荧光探针和检测引物；所述检测引物包括基于CYP2C19基因的rs12248560位点、基于CYP2C19基因的rs11249454位点、基于CYP2C19基因的rs4986893位点、PON1基因的rs662位点和ABCB1基因的rs4148727位点的引物；所述检测引物的基因序列为SEQ ID NO 1～SEQ ID NO 10。

进一步，所述PCR反应液包括Taq酶、dNTPs、Tris-HCl和KCl。

优选的，所述PCR反应液各组分浓度为Taq酶，200～350mg/L；dNTPs，80～120g/L；Tris-HCl，0.8～1.5mL/L；KCl，8～12g/L。

优选的，所述PCR反应液各组分浓度为Taq酶，300～320mg/L；dNTPs，100～110g/L；Tris-HCl，1～1.2mL/L；KCl，10g/L。

优选的，所述PCR反应液还包括有MgCl₂。

优选的，所述MgCl₂的浓度为15～30g/L。

优选的，所述MgCl₂的浓度为20～25g/L。