[发明专利]异质性肿瘤治疗用免疫细胞及其应用

说明书

本发明提供了异质性肿瘤治疗用免疫细胞及其应用，所述免疫细胞表达嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域和信号转导结构域；所述抗原结合结构域包括NKG2D；所述信号转导结构域包括4‑1BB、CD3ζ和TLR2。本发明的嵌合抗原受体对异质性肿瘤细胞具有靶向作用，构建的表达嵌合抗原受体的免疫细胞通过调动内源NKG2D的功能，实现对异质性肿瘤细胞的清除杀伤作用。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及异质性肿瘤治疗用免疫细胞及其应用。

背景技术

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)由肿瘤相关抗原结合区、胞外铰链区、跨膜区以及胞内信号转导区组成。通常，CAR分子包含的抗体单链片段可变区(single chain fragment variable，scFv)对肿瘤相关抗原(tumor associated antigen，TAA)具有特异性结合作用，其通过铰链和跨膜区与信号传导分子的胞质结构域偶联。

近年来，随着肿瘤免疫学理论和临床技术的发展，嵌合抗原受体T细胞疗法(Chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy，CAR-T)成为最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一。目前，CAR-T细胞疗法已经广泛应用于治疗B细胞恶性肿瘤，靶向CD19的CAR-T细胞是CAR-T疗法治疗B细胞恶性肿瘤的先驱，为治疗B细胞恶性肿瘤提供了有效方案。然而，很多肿瘤细胞并不表达专一、特异的肿瘤抗原，肿瘤异质性是细胞疗法治疗实体肿瘤面临的一大障碍。

因此，有必要开发针对异质性肿瘤细胞的嵌合抗原受体，提高嵌合抗原受体免疫细胞对无特异性抗原表达肿瘤的识别能力。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供了异质性肿瘤治疗用免疫细胞及其应用，所述免疫细胞通过调动内源NKG2D的功能，实现对异质性肿瘤细胞的清除杀伤作用，在治疗实体瘤方面具有广阔的前景。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、跨膜结构域和信号转导结构域；

所述抗原结合结构域包括NKG2D；

所述信号转导结构域包括4-1BB、CD3ζ和TLR2。

本发明中，采用NKG2D作为抗原结合结构域，与信号传导结构域连接后构建嵌合抗原受体，对肿瘤细胞具有明显的靶向作用。

优选地，所述抗原结合结构域包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；

SEQ ID NO:1：

FNQEVQIPLTESYCGPCPKNWICYKNNCYQFFDESKNWYESQASCMSQNASLLKVYSKEDQDLLKLVKSYHWMGLVHIPTNGSWQWEDGSILSPNLLTIIEMQKGDCALYASSFKGYIENCSTPNTYICMQRTV。

优选地，所述跨膜结构域包括CD28和/或CD8α。

优选地，所述嵌合抗原受体还包括信号肽。

优选地，所述信号肽包括GM-CSF信号肽。

优选地，所述嵌合抗原受体由GM-CSF信号肽、NKG2D、CD8α、4-1BB、CD3ζ和TLR2串联组成。

优选地，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；

SEQ ID NO:2：