[发明专利]一种用于转移性与非转移性胰腺癌鉴别诊断的生物标志物的检测试剂及应用

说明书

本发明涉及一种用于转移性与非转移性胰腺癌鉴别诊断的生物标志物的检测试剂，特别是包括血液胞外囊泡miRNA：hsa‑miR‑335‑5p和hsa‑miR‑340‑5p作为区分转移性与非转移性胰腺癌生物标志物。本发明首次提出并验证了血液胞外囊泡miRNA作为生物标志物，利用其表达水平区分转移性与非转移性胰腺癌时具有高敏感性，对于胰腺癌鉴别诊断具有重要意义。

技术领域

本发明涉及癌症鉴别诊断技术领域，尤其涉及一种用于转移性与非转移性胰腺癌鉴别诊断的生物标志物的检测试剂及应用。

背景技术

胰腺癌是一类高度恶性和侵袭性的消化系统疾病，其中超过90%为胰腺导管腺癌。胰腺癌早期发病并无症状，在初诊时约80%的胰腺癌患者已处于中晚期，并且约60%的患者存在胰腺癌细胞的远端转移至肝、肺和周围腹膜等，很难进行手术切除，患者五年生存率只有2%-9%。目前手术切除仍然是治疗胰腺癌一个重要且有效的手段，然而仅有20%的患者有机会进行手术切除。虽然手术切除能明显提高胰腺癌患者的中位生存期，但是高达80%患者在手术切除后会发生转移性复发，导致5年生存率仍仅有约20%-30%。在临床上如何鉴别诊断患者在转移部位病灶是原发病灶还是转移病灶，如何对影像学技术未检测到转移而实际发生转移的患者进行诊断避免不必要的手术切除是非常具有挑战性又常见的问题。因此，对转移性和非转移性胰腺癌患者进行鉴别诊断在临床上有重要意义。

目前，临床上常用的胰腺癌诊断和分期方法有胸部影像学、内镜超声引导下细针穿刺活检(EUS-FNA)和糖类抗原19-9(CA19-9)检测等，但这些检测方法在鉴别诊断胰腺癌患者是否存在远端转移具有一定的局限性。胸部影像学检测包括超声检查（US），多探测器计算机断层扫描（MDCT），磁共振成像(MRI)，正电子发射断层摄影(PET)等，影像学检测方法特异性和敏感性较低，难以区分患者是否存在远端转移。如MDCT对小于2cm的病变的检测敏感度只有80%，不能显示肝或腹的小转移。而 EUS-FNA 是一种侵入性的检测方法本身就容易引起肿瘤的扩散，并且特异性较低仅有60%-70%。CA19-9是基于血液的肿瘤标志物被广泛用于胰腺癌的预后监测，据报道CA19-9对于区分胰腺癌患者术后是否发生血液转移的敏感性和特异性较低，而且假阴性率较高。因此，仅采用影像学方法很难对胰腺癌患者是否存在远端转移进行诊断，迫切需要微创的肿瘤标志物对转移性和非转移性胰腺癌患者进行有效的鉴别。

胞外囊泡（Extracellular vesicles, EVs）是由多种不同类型细胞释放到细胞外的囊泡，几乎存在于所有的生物体液中。小型胞外囊泡包括一种直径约30-150 nm的由脂膜包裹的纳米泡状结构，也称为外泌体。一般是由细胞膜内陷形成内体，随后凹陷成为多囊泡体，最后分泌到细胞外基质中。胞外囊泡包含多种内容物如miRNA，mRNA，DNA和蛋白质等。机体在正常生理和病理条件下均能分泌胞外囊泡，进而与其他细胞进行物质交换和信息传递，在肿瘤发生和癌症转移中起着重要作用。鉴于胞外囊泡的广泛分布和重要功能，外周血中游离的小型胞外囊泡（外泌体）作为一种重要液体活检形式来检测多种疾病已得到广泛的关注和深入研究，大量研究表明癌细胞衍生的胞外囊泡在癌症发展早期会进入循环并与转移有关。但是，这些研究血液胞外囊泡miRNA作为生物标志物在鉴别胰腺癌是否发生转移的研究较少，也没有发现并验证可用于提高胰腺癌发生转移特异性的生物标志物。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提出一种用于转移性与非转移性胰腺癌鉴别诊断的生物标志物的检测试剂，利用血液胞外囊泡miRNA作为生物标志物，建立血液胞外囊泡miRNA生物标志物鉴别诊断模型，通过miRNA生物标志物表达水平区分转移性与非转移性胰腺癌时具有高敏感性。

为实现以上目的，本发明所采用的技术方案包括：

一种用于转移性与非转移性胰腺癌鉴别诊断的生物标志物的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂针对性检测的生物标志物包括血液胞外囊泡miRNA生物标志物，所述血液胞外囊泡miRNA生物标志物为hsa-miR-335-5p和hsa-miR-340-5p的组合。