[发明专利]一种兼具抗菌、抗炎、中和内毒素和免疫调节活性的多功能杂合肽及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及蛋白质工程技术领域，具体涉及一种兼具抗菌、抗炎、中和内毒素和免疫调节活性的多功能杂合肽及其制备方法和应用。本发明提供的杂合肽包含：肽I以及与肽I融合的肽II，其中，肽I的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，肽II的氨基酸序列如SEQ ID NO.2的第19～29位所示。该杂合肽同时具有抗菌、中和内毒素、免疫调节和抗炎功能，并且具有细胞毒性低、安全性高，制备方便、成本低廉的优势，可作为理想的抗菌剂、内毒素中和剂、免疫调节剂和抗炎剂，广泛用于人和动物的医药、食品、保健、饲料、营养等领域，具有很好的应用潜力和价值。

技术领域

本发明涉及蛋白质工程技术领域，具体涉及一种具有抗菌、抗炎、中和内毒素和免疫调节活性的杂合肽及其制备方法和应用。

背景技术

细菌感染是致病菌或条件致病菌侵入动物机体中生长繁殖，产生毒素(如内毒素)和其他代谢产物所引起的感染性疾病，可诱发炎症以及氧化损伤等，重则损坏免疫系统，甚至导致死亡。动物在幼龄、体弱、疾病、应激、病原感染等情况下，经常导致免疫力降低，进而发生继发感染(细菌感染等)，引起炎性反应。对于感染和炎症治疗，传统的防治策略是使用抗生素和化学药物制剂。抗生素和化学药物制剂的持续使用不仅容易产生耐药性和多种副作用，而且容易造成药物残留和食品安全风险。

在实际应用中，为控制细菌感染、炎症或免疫机能损伤，往往需要将抗菌、免疫调节以及抗炎药物进行交替使用或者配伍使用，这明显增加了临床选药的复杂性和经济负担。因此，开发高效、无毒、无残留或低残留量的具有抗菌、免疫调节、抗炎等多功能性生物制剂具有重要意义。

新型抗病原微生物、免疫调节及抗炎药物主要包括功能性益生菌制剂、植物提取物以及生物活性肽等。

生物活性肽是指对机体生命活动有益或者具有一定生理作用的肽类化合物，其分子量一般小于6000Da。不同的生物活性肽在氨基酸组成、排列顺序以及空间结构等方面存在差异，从而表现出不同的生理功能，如免疫调节、抗炎、镇静、抗菌、抗病毒、抗氧化、降血压。研究发现，生物活性肽还具有不易产生耐药性和药物残留等优势。因此，生物活性肽在提高免疫力、防治病原体引起的感染、炎症、免疫损伤等方面具有广阔的应用前景和开发潜力。

然而，天然的生物活性肽也存在着一些缺陷，主要表现为：(1)有些天然生物活性肽的生物活性相对较低、功能较单一，如猪的乳铁蛋白肽存在抗菌活性较弱的问题；而天蚕素A虽然具有良好的抗菌功效，但其抗炎能力却相对较弱；(2)一些天然生物活性肽的细胞毒性较高，在抑杀病原微生物的同时也会造成机体的严重损伤(如蜂毒素(melittin)和LL-37)。通过对天然的生物活性肽进行改造以提高其生物活性、扩展其功能，开发高效多功能的生物活性肽具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有抗菌、抗炎、中和内毒素和免疫调节活性的杂合肽，本发明的另一目的是提供该杂合肽的其制备方法和应用。

为实现上述目的，本发明选择免疫抗炎多肽LTP(序列如SEQ ID NO.2所示)和抗菌抗病毒多肽CL(序列如SEQ ID NO.1所示)为母源肽，在对免疫抗炎多肽LTP及抗菌抗病毒多肽CL的序列、结构以及序列结构与功能的关系进行大量研究的基础上，运用蛋白质分子设计技术进行LTP和CL的杂合优化，经不断筛选、验证和优化，最终获得一种多功能杂合肽，命名为CLP。CLP包含CL以及LTP的第19～29位氨基酸，其中一个多功能杂合肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。杂合肽CLP同时具有两个母源肽的功能，且其抗菌、中和内毒素、免疫调节和抗炎活性较两个母源肽均有显著提高。

具体地，本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种杂合肽，其包含：肽I以及与肽I融合的肽II，其中，肽I的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，肽II的氨基酸序列如SEQ ID NO.2的第19～29位所示。

本发明所述的杂合肽的结构优选为：肽II的N端与肽I的C端直接或经连接肽融合。