[发明专利]一种转基因棉花COT102品系的双重荧光定量PCR检测

权利要求书

1.一种同时检测两种目标基因以确定棉花成分及其种型的方法，包括：

以待测样品的DNA为模板进行PCR扩增，扩增体系中包括：

外源基因试剂组(a)：SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的引物和SEQ ID NO:6所示的探针；和

内源基因试剂组(b)：SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:23所示的引物和SEQ ID NO:24所示的探针；

若试剂组(a)和试剂组(b)发生特异性扩增，则表明待测样品中包含转基因棉花COT102品系的成分；

若试剂组(a)不发生特异性扩增，试剂组(b)发生特异性扩增，则表明待测样品含有棉花成分，但不包含转基因棉花COT102品系的成分；

若试剂组(a)和试剂组(b)均不发生特异性扩增，则表明待测样品中不存在棉花成分。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法为定量方法，当试剂组(a)和试剂组(b)发生特异性扩增时，分别确定试剂组(a)和试剂组(b)的扩增量，从而得出转基因棉花COT102品系的成分的含量或含量比例；

较佳地，通过PCR扩增反应后产生的荧光强度来确定扩增量。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针携带荧光标记，且两者的荧光标记不同；

较佳地，SEQ ID NO:6所示的探针，以FAM作为特异性的荧光基团，以BHQ1作为对应的猝灭基团；

较佳地，SEQ ID NO:24所示的探针，以HEX作为特异性的荧光基团，以BHQ1作为对应的猝灭基团。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，扩增体系中，试剂组(a)中引物和探针的用量比试剂组(b)中引物和探针的用量多20～80％；较佳地多30～70％；更佳地多40～60％。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，扩增体系中，以HR qPCR Master Mix作为PCR预混液；

所述的待测样品包括：植物活体、植物加工材料、植物提取物或活性部位；和/或

所述PCR扩增中，退火温度59±1℃；较佳地59±0.5℃。

6.一种用于同时检测两种目标基因以确定棉花成分及其种型的试剂盒，其中包括：

外源基因试剂组(a)：SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的引物和SEQ ID NO:6所示的探针；和

内源基因试剂组(b)：SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:23所示的引物和SEQ ID NO:24所示的探针。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针携带荧光标记，且两者的荧光标记不同；

较佳地，SEQ ID NO:6所示的探针，以FAM作为特异性的荧光基团，以BHQ1作为对应的猝灭基团；

较佳地，SEQ ID NO:24所示的探针，以HEX作为特异性的荧光基团，以BHQ1作为对应的猝灭基团。

8.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中，试剂组(a)中引物和探针的量比试剂组(b)中引物和探针的量多20～80％；较佳地多30～70％；更佳地多40～60％。

9.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，其中还包括选自下组的一种或多种：

PCR预混液；较佳地为HR qPCR Master Mix；

DNA提取试剂；

PCR缓冲液；或

使用说明书。

10.权利要求6～9任一所述的试剂盒的应用，用于：

同时检测两种目标基因以确定棉花成分及其种型，所述的目标基因为COT102基因以及ACP1；或

定性或定量地鉴定待测样品种是否存在转基因棉花COT102品系的成分，或确定转基因棉花COT102品系在待测样品中的比例。