[发明专利]一种用于体外扩增自体人毛囊间充质干细胞培养基及其培养方法在审
申请号: | 202010736863.0 | 申请日: | 2020-07-28 |
公开(公告)号: | CN111849883A | 公开(公告)日: | 2020-10-30 |
发明(设计)人: | 李鹏东;钟祥凤 | 申请(专利权)人: | 李鹏东;钟祥凤 |
主分类号: | C12N5/0775 | 分类号: | C12N5/0775 |
代理公司: | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人: | 董大媛 |
地址: | 130012 *** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 体外 扩增 毛囊 间充质 干细胞 培养基 及其 培养 方法 | ||
1.一种用于体外扩增自体人毛囊间充质干细胞的培养基,其特征在于,以DMEM/F-12为基础培养基,包含以下含量的组分:体积百分含量4~6%自体血清、9~11ng/mlbFGF和0.8~1.2%青霉素-链霉素。
2.根据权利要求1所述用于体外扩增自体人毛囊间充质干细胞的培养基,其特征在于,以DMEM/F-12为基础培养基,包含以下含量的组分:体积百分含量5%自体血清、10ng/mlbFGF和1%青霉素-链霉素。
3.根据权利要求1或2所述用于体外扩增自体人毛囊间充质干细胞的培养基,其特征在于,所述自体血清的制备方法,将自体静脉血经冷藏静置,将静置后的全血进行离心,收集的上清液进行微滤得到自体血清。
4.根据权利要求3所述用于体外扩增自体人毛囊间充质干细胞的培养基,其特征在于,所述离心的转速为2800~3200rpm;所述离心的时间为13~17min,所述离心的温度为3~6℃。
5.根据权利要求3所述用于体外扩增自体人毛囊间充质干细胞的培养基,其特征在于,所述冷藏的温度为4℃,所述静置的时间为1~1.5h;
所述微滤时,采用的微滤器的滤膜孔径为0.22μm。
6.一种体外扩增自体人毛囊间充质干细胞培养的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)将自体毛囊在毛囊培养基中预培养,获得自体毛囊间充质干细胞;
所述毛囊培养基是以DMEM/F-12培养基为基础培养基,包含体积百分含量的5%自体血清和1%青霉素-链霉素;
2)将步骤1)中所述自体毛囊间充质干细胞在权利要求1~5任意一项所述培养基中进行扩增培养,得到自体毛囊间充质干细胞库。
7.根据权利要求6所述方法,其特征在于,步骤1)中所述预培养或步骤2)中所述扩增培养的培养温度为36~38℃,所述培养时间为7~14d。
8.根据权利要求6或7所述方法,其特征在于,步骤1)中所述自体毛囊的获取方法采用FUE方式进行,采用毛囊获取仪对单个毛囊单位进行游离提取,单个毛囊在无菌条件下分离、培养,获取毛囊间充质干细胞。
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