[发明专利]一种生产N-乙酰氨基葡萄糖的菌株及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种生产N-乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株在40-50℃条件下发酵生产所述N-乙酰氨基葡萄糖。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株的起始菌为嗜热菌。

3.根据权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株的起始菌为芽孢杆菌。

4.根据权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株的起始菌为地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、甲基营养芽孢杆菌、嗜热菊糖芽孢杆菌或嗜热脂肪地芽孢杆菌。

5.根据权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株的起始菌为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)ATCC 14580。

6.根据权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BNGS1，保藏号为CCTCC NO:M2020054，于2020年3月14日保藏于中国典型培养物保藏中心。

7.根据权利要求1所述的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株的起始菌中的N-乙酰氨基葡萄糖及N-乙酰氨基葡萄糖中间产物分解代谢途径和向胞内转运的途径被阻断。

8.根据权利要求7所述的基因工程菌株，其特征在于，所述N-乙酰氨基葡萄糖及所述N-乙酰氨基葡萄糖中间产物分解代谢的途径，通过6-磷酸氨基葡萄糖脱氨酶nagB和gamA基因，6-磷酸-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶nagA基因中一种或多种的失活或缺失而被阻断；向胞内转运N-乙酰氨基葡萄糖的途径，通过N-乙酰氨基葡萄糖转运蛋白gamP和nagP基因中的一种或两种的失活或缺失而被阻断。

9.根据权利要求7所述的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株中被引入过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶基因和6-磷酸氨基葡萄糖乙酰化酶基因。

10.根据权利要求8所述的基因工程菌株，其特征在于，所述6-磷酸氨基葡萄糖乙酰化酶基因序列如SEQ ID NO.1所示。

11.根据权利要求9所述的基因工程菌株，其特征在于，所述6-磷酸氨基葡萄糖合成酶基因序列如SEQ ID NO.2所示。

12.一种如权利要求1-11任一项所述的基因工程菌株的构建方法，其特征在于，所述方法包括，使起始菌中的N-乙酰氨基葡萄糖分解代谢途径中的6-磷酸氨基葡萄糖脱氨酶基因，6-磷酸-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶基因，以及N-乙酰氨基葡萄糖转运蛋白基因中的一种或多种失活或缺失；引入过表达6-磷酸氨基葡萄糖合成酶基因和6-磷酸氨基葡萄糖乙酰化酶基因。

13.一种如权利要求12所述的构建方法，其特征在于，所述包括以下步骤：

A.敲除起始菌中的6-磷酸氨基葡萄糖脱氨酶nagB和gamA基因，6-磷酸-N-乙酰氨基葡萄糖脱乙酰酶nagA基因，以及N-乙酰氨基葡萄糖转运蛋白gamP基因和nagP基因，得到敲除菌株；

B.构建6-磷酸氨基葡萄糖合成酶glmS基因以及6-磷酸氨基葡萄糖乙酰化酶GNA1基因双表达载体；

C.将所述双表达载体转入到步骤A所得到的所述敲除菌株中，得到生产N-乙酰氨基葡萄糖的所述基因工程菌株。

14.根据权利要求13所述的构建方法，其特征在于，所述双表达载体的构建方法为引入启动子，将表达载体与所述启动子，glmS基因，GNA1基因进行串联表达。

15.根据权利要求14所述的构建方法，其特征在于，所述表达载体为pHY300PLK。