[发明专利]一种石斛的在线富集方法

说明书

本发明涉及天然药物的分离富集领域，尤其是涉及一种石斛的在线富集方法，包括如下步骤：（1）将石斛提取液加入至含有CD的磷酸溶液中得到样品溶液；（2）将甲醇与SDS溶解在磷酸溶液中得到BGS溶液；（3）将经超声和过滤处理的样品溶液通过经活化并用BGS溶液冲洗的毛细管进样；（4）在高电压下进行分离与富集，得到分离与富集后的活性物质。本发明采用CD辅助的扫集‑MEKC方法富集石斛中的活性物质，在分离效果好的同时还具有富集效率高、操作简单、有机溶剂用量少、分析时间短、不需要附加仪器等优点；同时使用CD增加石斛中有效成分在水中的溶解度，进而提高石斛中有效成分在经过毛细管电泳后的分离与富集效果。

技术领域

本发明涉及天然药物的分离富集领域，尤其是涉及一种石斛的在线富集方法。

背景技术

铁皮石斛是一种濒危的珍贵药材，由于其药理和临床作用，几个世纪以来在中国和亚洲其他国家被广泛用作中药材和功能性食品。从清代起，铁皮石斛的茎、即铁皮枫斗就作为中药材被广泛使用。它具有滋阴、益胃、润肺和延年益寿的作用。药理研究表明，铁皮石斛具有多种药理活性，如抗炎、抗肿瘤、免疫调节、降血糖等。铁皮石斛的主要活性成分为多糖和酚类。

迄今为止，对铁皮石斛的研究主要集中在多糖方面，集中在分析其他化合物如酚类的研究十分有限，并且以往的研究主要采用了高效液相色谱法、近红外光谱法、超高效液相色谱-电喷雾质谱法等检测方法，例如公开号为CN106680403A的“一种检测铁皮石斛中石斛酚的方法”，包括以下步骤：(1)标准品溶液的配制；(2)供试品溶液的配制：称取铁皮石斛样品，然后用甲醇水溶液作为提取溶剂对铁皮石斛样品进行提取，得到铁皮石斛提取液，之后将铁皮石斛提取液中的溶剂除干，再复溶于色谱级甲醇中，然后放置12～24小时，最后进行过滤处理，所得的滤液即为供试品溶液；(3)供试品溶液的测定：采用HPLC-DAD检测方法对标准品溶液和供试品溶液进行检测。该方法只能提取石斛中的石斛酚，而对于石斛中的其他物质并不能做到很好地富集与分离，并且该方法的富集与分离效果并不够理想。

发明内容

本发明是为了克服技术的只能分离富集小部分活性物质、富集与分离效果不理想的缺点，提供一种石斛的在线富集方法，能够同时从石斛中分离并富集多种活性物质，并且分离效果好、富集程度高。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种石斛的在线富集方法，包括如下步骤：

(1)将石斛提取液加入至含有CD的磷酸溶液中，得到CD浓度为30-130mM的样品溶液；

(2)将甲醇与SDS溶解在磷酸溶液中得到BGS溶液；

(3)将经超声和过滤处理的样品溶液通过经活化并用BGS溶液冲洗的毛细管进样50-200s；

(4)在高电压下进行分离与富集，得到分离与富集后的活性物质。

本发明采用CD辅助的扫集-MEKC方法富集石斛中的活性物质，在该方法中，样品溶液不含伪固定相PSP，与含有PSP的背景缓冲液BGS相比，其具有较低，相似或较高的电导率。当施加电压后，PSP穿透样品区，样品区内的分析物与BGS中的PSP发生分配和相互作用，使得分析物被采集并积累。在扫集过程中，分析物区域不断缩小，石斛中多种有效成分被分离并富集，分离效果好的同时还具有富集效率高、操作简单、有机溶剂用量少、分析时间短、不需要附加仪器等诸多优点。

CD是通过酶解淀粉得到的环状低聚糖，其具有截锥状结构，并具有亲水的外表面和疏水的内腔。CD结构上众多的羟基可以与水溶液中的水形成氢键，增加了CD在水中的溶解度。并且CD能通过非共价相互作用将石斛中的活性物质全部或部分吸收到它们的疏水空腔中，从而与石斛中的活性物质形成包合物，使得石斛中的活性物质溶解在CD中，并改善了石斛中的活性物质的化学稳定性和水溶解度等，从而提高毛细管电泳在线富集技术的灵敏度，有利于提高分离与富集效果。