[发明专利]一种有效筛选磷虾油中磷脂的分析检测方法

权利要求书

1.一种有效筛选磷虾油中磷脂的分析检测方法，其特征在于,包括以下步骤：

①取每10g的磷虾粉，碾磨均匀后加入100～300mL的三氯甲烷-甲醇混合溶液中，于室温下振荡1～3分钟，得A提取液；

②对A提取液进行超声处理，使磷虾油从固体机制中释放，得b1混合物，再将b1混合物离心，收集下层有机相和离心后的残留物，得B有机相和C残留物；

③对C残留物用100～300mL的三氯甲烷重新提取多次，收集下层有机相，得D有机相；

④将B有机相和得D有机相混合后得e1萃取液，然后将e1萃取液吹干后用乙腈定容，然后过有机滤膜，得到E待测液；

⑤将E待测液通过前体离子扫描模式下的亲水作用液相色谱质谱联用法进行检测。

2.根据权利要求1所述的一种有效筛选磷虾油中磷脂的分析检测方法，其特征在于，所述步骤②的具体步骤为：将A提取液于20kHz、130W条件下超声辅助提取10～20min，得b1混合物，然后在3～5℃下将b1混合物以8000g离心8～12min，得B有机相和C残留物。

3.根据权利要求1所述的一种有效筛选磷虾油中磷脂的分析检测方法，其特征在于，所述步骤④的具体步骤为：将B有机相和得D有机相混合后得e1萃取液，然后在4℃的环境温度下用氮气流将e1萃取液吹干，然后再用1mL的乙腈定容，过0.22μm有机滤膜，得到E待测液。

4.根据权利要求1所述的一种有效筛选磷虾油中磷脂的分析检测方法，其特征在于，所述步骤⑤中的液相色谱质谱法的液相色谱条件为：液相色谱柱为Cosmosil-HILIC色谱柱；进样量为2μL，色谱柱温度保持在30℃；流动相A是向20mmol的甲酸铵和20mmol的甲酸混合溶液中加入纯水并定容至1L得到；流动相B为配甲酸浓度为20mmol的甲酸乙腈溶液。

5.根据权利要求1所述的一种有效筛选磷虾油中磷脂的分析检测方法，其特征在于，所述步骤⑤中液相色谱质谱法的液相色谱柱洗脱方法具体为：0～10min时，流动相B由95％均匀降至70％，10～15min时，流动相B由70％均匀降至50％，15～20min时，流动相B保持在50％。

6.根据权利要求1所述的一种有效筛选磷虾油中磷脂的分析检测方法，其特征在于，所述步骤⑤中液相色谱质谱法的质谱测定方式具体为：以2μL的进样量将E待测液注入电喷雾电离源中，以负离子的方式进行前体离子扫描，EPA型结构磷脂和DHA型结构磷脂的产物离子分别设置为m/z301和m/z327。

7.根据权利要求1所述的一种有效筛选磷虾油中磷脂的分析检测方法，其特征在于，所述步骤⑤中液相色谱质谱法的质谱条件具体为：在负离子模式下将离子喷雾电压设置在4500V，离子源温度保持在500℃；离子源气体中的气帘气、干燥气体和雾化器气体分别设置为35psi、50psi、60psi；质谱测量范围为m/z450～950，扫描速率为每个光谱1s；然后完成数据采集、处理和分析。

8.根据权利要求1所述的一种有效筛选磷虾油中磷脂的分析检测方法，其特征在于，所述步骤⑤中液相色谱质谱法在对E待测液中的磷脂酰胆碱离子进行检测时，质谱条件中的碰撞电压为50eV，去簇电压为100eV；液相色谱质谱法在对E待测液中的磷脂酰乙醇胺离子进行检测时，质谱条件中的碰撞电压为40eV，去簇电压为100eV；液相色谱质谱法在对E待测液中的磷酯酰肌醇离子进行检测时，质谱条件中的碰撞电压为50eV，去簇电压为70eV。