[发明专利]一种评价膳食多糖活性的方法

权利要求书

1.一种评价膳食多糖活性的方法，其特征在于包括以下操作步骤：

(1)将微生物基础培养基中碳源葡萄糖换成膳食多糖，即培养基包含：膳食多糖10g/L，蛋白胨2.0g/L，酵母膏2.0g/L，氯化钠0.1g/L、磷酸氢二钾0.04g/L，磷酸二氢钾0.04g/L，硫酸镁0.01g/L，氯化钙0.01g/L，碳酸氢钠2.0g/L，氯化血红素0.02g/L，半胱氨酸盐酸盐0.5g/L，胆盐0.5g/L，刃天青1.0g/L，Tween 80 2.0mL/L和维生素K₁10μL/L；

(2)体外发酵粪便样品由4位健康志愿者(2男2女，年龄22至28岁)提供，志愿者在3个月内未服用抗生素或者益生产品且没有胃肠疾病。收集新鲜粪便后立即等量混合并加入9倍质量的灭菌后的生理盐水(NaCl 8.5g/L，半胱氨酸盐酸盐0.5g/L)并搅拌均匀、离心(250rmp)得到10％的粪便悬浮液；

(3)将步骤(2)中得到的粪便悬浮液以1∶9的比例加入到步骤(1)得到的以膳食多糖为碳源的培养基中；

(4)将步骤(3)中配制的培养体系置于37℃且无氧环境中培养24h后，离心过0.22μm膜得到膳食多糖发酵液；

(5)将步骤(4)所得膳食多糖发酵液进行代谢组学分析鉴定膳食多糖的发酵产物。

(6)在Transwell板上室种Caco-2细胞模拟单层细胞模型，下室种评价多糖活性的细胞。将步骤(4)中所得膳食多糖发酵液加入Transwell板上室培养24h后，利用代谢组学测定哪些产物可以穿过Caco-2单层细胞模型，并测定下室细胞相关指标评价膳食多糖活性。

2.根据权利1中的一种评价膳食多糖活性的方法。其特征在于将微生物基础培养基中碳源换成膳食多糖进行厌氧发酵。培养基包含：膳食多糖10g/L，蛋白胨2.0g/L，酵母膏2.0g/L，氯化钠0.1g/L、磷酸氢二钾0.04g/L，磷酸二氢钾0.04g/L，硫酸镁0.01g/L，氯化钙0.01g/L，碳酸氢钠2.0g/L，氯化血红素0.02g/L，半胱氨酸盐酸盐0.5g/L，胆盐0.5g/L，刃天青1.0g/L，Tween 80 2.0mL/L和维生素K₁10μL/L。

3.根据权利1中的一种评价膳食多糖活性的方法。其特征在于利用膳食多糖肠道微生物发酵液进行活性评价。

4.根据权利1中的一种评价膳食多糖活性的方法。其特征在于利用液相、气相或代谢组学等鉴定膳食多糖微生物代谢产物。

5.根据权利1中的一种评价膳食多糖活性的方法，其特征在于利用Caco-2单层细胞模型探究膳食多糖发酵液中哪些代谢产物可以穿过Caco-2单层细胞模型。

6.根据权利1中的一种评价膳食多糖活性的方法，其特征在于：利用在Transwell下室培养不同细胞模型来探究穿过Caco-2单层细胞模型代谢产物的生物活性。