[发明专利]一种直接诱导黄花柳茎段成苗快繁的方法

说明书

本发明是单配方诱导黄花柳茎成苗快繁发明技术，属发明技术领域。主要技术要点是以黄花柳当年生茎段为外植体，接种于培养基Ms+KT0.4 mg·L^‑1+IBA0.1 mg·L^‑1+GA₃1.0 g·L^‑1+蔗糖30g·L^‑1+琼脂6g·L^‑1配方上，诱导丛生芽最好，再接种于MS+KT0.4mg·L^‑1+IBA0.2mg·L^‑1+GA₃1.0 g·L^‑1+琼脂6g·L^‑1+蔗糖30g·L^‑1配方上，增殖效果最佳；将增殖苗放入同激素配比KT:NAA(0.2:0.2)培养基中壮苗后接入1/2MS+IBA0.1mg·L^‑1+NAA0.1mg·L^‑1+20g·L^‑1蔗糖+6g·L^‑1琼脂+0.5g·L^‑1AC进行生根培养，最后移栽炼苗，有利于缩短组培周期，降低生产成本，适用于工厂化规模育苗。

技术领域

本发明涉及黄花柳茎段直接诱导丛生芽及生根快繁方法，属于生物育种技术领域。

背景技术

目前，国内未发现黄花柳组培快繁报道，黄花柳为杨柳科植物，常见杨柳科植物繁殖放式多为扦插，扦插数量有限，扦插方式难以达到生产需求，因黄花柳体内含有生根阻碍物质，被誉为最难扦插植物，目前为止，并没看到相关扦插报道。但黄花柳植物本身具有很高的观赏价值及药用价值，可祛风除湿、治筋骨痛，牙龈肿痛，恶疮等疾病，也可供家具农具用，还可以提炼五种以上黄酮成分供于医学。本文以黄花柳茎段为外植体进行快繁实验，而植物微体快繁技术具有繁殖系数高、繁殖周期短、繁殖速度快的特点，对柳属特别是扦插不易生根植物生物学研究具有重要的理论意义，且组培苗移栽不受季节的限制，有利于其规模化生产。

发明内容

本发明采用黄花柳当年生带芽茎段为材料，直接诱导丛生芽，从而建立黄花柳组培快繁体系。本发明先利用茎段直接诱导丛生芽，诱导率为95％，接着进行增殖培养，丛生芽增殖率为93.67％，且苗木健壮，然后同浓度(KT/IBA)激素转接进行壮苗，最后经 1/2MS+IBA0.1mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1+20g·L^-1蔗糖+6 g·L^-1琼脂+0.5g·L^-1AC生根，生根率可达到98.33a％，最后进行炼苗试验。本发明不仅克服黄花柳繁殖系数低等缺点，而且缩短繁殖时间，降低生产成本，提高工作效率并适用于工厂规模化育苗的目的。

具体工艺步骤如下：

一种直接诱导黄花柳茎段成苗快繁的方法，包括如下步骤：

(1)外植体的采集与处理

将黄花柳带芽茎段基部经GA₃浸泡、洗衣粉溶液浸泡、流水冲洗、酒精浸泡后经消毒得到外植体；

(2)培养条件

将消毒后的外植体接种到不含激素的MS空白培养基中，进行光照培养，得到无菌外植体；

(3)丛生芽诱导

将无菌外植体切段，转接到添加有KT、IBA的混合激素及GA₃的MS培养基的诱导培养基中，单芽诱导培养15-30d，得到黄花柳不定芽；

(4)丛生芽增殖

将诱导的黄花柳不定芽切割转管到添加有KT、IBA的混合激素及GA₃的MS培养基的增殖培养基上，丛生芽增殖培养10-25d，得到丛生芽；

(6)壮苗生根