[发明专利]一种黑水虻抗菌肽的提取方法

权利要求书

1.一种黑水虻抗菌肽的提取方法，其特征在于，按下述步骤进行：

（1）按米曲霉制种方法制备一定量的米曲霉种子液，米曲霉种子液加入乳酸杆菌扩大培养24小时成为发酵液，发酵液中乳酸杆菌菌体密度2-4亿个/升；

（2）用有机废弃物制备黑水虻养殖料，有机废弃物包括畜禽粪便、餐饮垃圾、蔬菜水果垃圾、作物秸秆；

（3）接种米曲霉种子液于黑水虻养殖料中，米曲霉种子液与黑水虻养殖料的质量比为1：10-20，制备成发酵养殖料；

（4）将黑水虻幼虫投入步骤（3）制备的发酵养殖料中，控制养殖环境温度25-32℃，湿度65-75%，养殖幼虫达到5龄幼虫；

（5）将步骤（4）养殖的黑水虻5龄幼虫与发酵养殖料分离，将5龄幼虫置于步骤（1）制备的发酵液中再养殖24小时，米曲霉和乳酸杆菌诱导黑水虻产生更多抗菌肽；

（6）将步骤（5）养殖24小时的幼虫及发酵液一起置于胶体磨，粉碎均质10-20分钟后置于恒温反应器中，30℃下反应12-36小时得到降解液，米曲霉蛋白酶会将黑水虻部分大分子蛋白降解为小分子的类抗菌肽；

（7）将步骤（6）得到的降解液用10000转/分，离心去除非蛋白杂质，得到降解物的上清液；

（8）降解物上清液以0.5mol/L三氯乙酸沉淀大分子蛋白，静置30分钟后10000转/分再次离心，得到去大分子上清液；

（9）去大分子上清液用海藻酸过滤吸附，再用0.2mol/L盐酸溶液洗脱吸附在海藻酸上的抗菌肽；

（10）将洗脱液用氢氧化钠调解PH值为4.5后，用氯化钠沉析，透析，脱盐干燥得抗菌肽粗品；

（11）将抗菌肽粗品用超纯水溶解，经过0.22μm-0.45μm超滤膜过滤，得到超滤液，冰冻干燥得目标抗菌肽。