[发明专利]一种转染小鼠原代神经元的慢病毒载体及构建方法

权利要求书

1.一种转染小鼠原代神经元的慢病毒载体，其特征是，包括基因元件组成的基因片段，所述基因元件按以下顺序顺次连接：U6启动子、miR30(mmu-miR-29a-3p)基因、hSyn启动子、mNeonGreen标记基因。

2.根据权利要求1所述的一种转染小鼠原代神经元的慢病毒载体，其特征是，所述hSyn-mNeonGreen基因片段的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求2所述的一种转染小鼠原代神经元的慢病毒载体，其特征是，所述miR30(mmu-miR-29a-3p)基因的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.一种转染小鼠原代神经元的慢病毒载体的构建方法，其特征是，包括以下步骤：

(1)将慢病毒载体pSLenti-U6-shRNA-CMV-EGFP-2A-Puro中的CMV-EGFP-2A-Puro基因元件替换为hSyn-mNeonGreen基因，得到载体pSLenti-U6-shRNA-hSyn-mNeonGreen，hSyn-mNeonGreen基因的核酸序列如SEQ ID NO.1所示；

(2)将慢病毒载体pSLenti-U6-shRNA-hSyn-mNeonGreen中的shRNA基因替换为miR30(mmu-miR-29a-3p)基因，得到慢病毒载体pSLenti-U6-miR30(mmu-miR-29a-3p)-hSyn-mNeonGreen，miR30核酸序列如SEQ ID NO.2所示。

5.根据权利要求4所述的一种转染小鼠原代神经元的慢病毒载体的构建方法，其特征是，在步骤(1)中，将SEQ ID NO.1所示的hSyn-mNeonGreen基因插入到pSLenti-U6-shRNA-CMV-EGFP-2A-Puro中的上游克隆酶切位点EcoRI、下游克隆酶切位点SpeI之间，基因大小为1199bp。

6.根据权利要求5所述的一种转染小鼠原代神经元的慢病毒载体的构建方法，其特征是，所述步骤(1)中PCR扩增的引物核酸序列为：

正向测序引物GL427-F：AGCTACTCCACCACTTGTTC SEQ ID NO.3；

正向测序引物WPRE-R：CATAGCGTAAAAGGAGCAACA SEQ ID NO.4。

7.根据权利要求4所述的一种转染小鼠原代神经元的慢病毒载体的构建方法，其特征是，在步骤(2)中，将SEQ ID NO.2所示的miR30(mmu-miR-29a-3p)基因插入到慢病毒载体pSLenti-U6-shRNA-hSyn-mNeonGreen中的上游克隆酶切位点AgeI、下游克隆酶切位点EcoRI之间，基因大小为331bp。

8.根据权利要求7所述的一种转染小鼠原代神经元的慢病毒载体的构建方法，其特征是，所述步骤(2)中PCR扩增的引物核酸序列为：

正向测序引物hU6-F2：TACGATACAAGGCTGTTAGAGAG SEQ ID NO.5；

反向测序引物H15546-R：GTTGGGTGCTTGTCCAGTG SEQ ID NO.6。

9.一种慢病毒，其特征是，所述慢病毒包含如权利要求1-3任意一项所述的慢病毒载体。

10.一种检测试剂盒，其特征是，所述检测试剂包含如权利要求9所述的慢病毒。