[发明专利]烯丙基硫醚在制备促进铜绿假单胞菌叶酸生物合成制剂中的应用

说明书

本发明公开了烯丙基硫醚在制备促进铜绿假单胞菌叶酸生物合成制剂中的应用。本发明发现DAS不会抑制铜绿假单胞菌PAO1菌株的生长，但能够使该菌叶酸合成通路中的关键基因表达上调，提高该菌的叶酸生物合成水平。因此烯丙基硫醚可应用于细菌发酵生产叶酸工业中，提高叶酸的发酵产量。

技术领域：

本发明属于细菌发酵技术领域，具体涉及烯丙基硫醚在制备促进铜绿假单胞菌叶酸生物合成制剂中的应用。

背景技术：

大蒜是常见的食物，其用作民间医药的历史已有几千年。现代科学研究证明，大蒜精油中含硫化合物具有较强的抗菌消炎作用，对多种细菌、真菌和病毒均有抑制作用。烯丙基硫醚(Diallyl sulfide，DAS)是大蒜精油中一种含硫丰富的化合物。叶酸，即维生素B₉，它是一种水溶性的B族维生素。叶酸在绿叶蔬菜、酵母和动物肝脏中含量丰富，是人体必需的一种非常重要的维生素，但人类自身不能合成叶酸，必须依靠食物供给。人体缺乏叶酸会引起红细胞异常，贫血以及白细胞的减少。叶酸也是胎儿生长发育不可缺少的营养元素，孕妇缺乏叶酸可引起胎儿发育缺陷和畸形。

发明内容：

本发明的目的是提供一种烯丙基硫醚在制备促进铜绿假单胞菌叶酸生物合成制剂中的应用。

本发明通过实验表明，烯丙基硫醚(DAS)能够提高了铜绿假单胞菌培养液中叶酸的产量。

因此，本发明的目的是提供烯丙基硫醚在制备促进铜绿假单胞菌叶酸生物合成制剂中的应用。

本发明的第二个目的是提供一种促进铜绿假单胞菌叶酸生物合成制剂，含有烯丙基硫醚作为活性成分。

所述的铜绿假单胞菌优选为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PAO1。

本发明发现DAS能够提高了铜绿假单胞菌培养液中叶酸的产量，因此可以用于制备促进铜绿假单胞菌叶酸生物合成制剂中应用。

附图说明：

图1是DAS作用下铜绿假单胞菌PAO1的生长曲线；

图2是DAS作用下铜绿假单胞菌PAO1的转录组KEGG富集分析的叶酸合成通路图。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PAO1悬液的制备：将指数生长期的铜绿假单胞菌PAO1培养液取样，离心，用PBS缓冲液洗涤一次，重悬于PBS中，并将菌浓度稀释至10⁸CFU/mL，得到铜绿假单胞菌PAO1菌悬液。

1.烯丙基硫醚对铜绿假单胞菌生长的影响

分别向试管中加入LB培养基、DAS，并接入指数生长期的铜绿假单胞菌PAO1菌悬液，总体积均为10mL，使铜绿假单胞菌PAO1的菌浓度均为10⁶CFU/mL，DAS的浓度分别为0(对照)、0.16μl/mL、0.31μl/mL、0.63μl/mL、1.25μl/mL、2.5μl/mL和5.0μl/mL。将几个实验组分别取样加入到自动生长曲线测定仪(Bioscreen C)专用的蜂窝培养板中，每孔加入350μL的培养液，每个实验组三个平行。将蜂窝培养板置于自动生长曲线测定仪中，37℃振荡培养3天，每小时测定一次OD₆₀₀。以OD₆₀₀为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制DAS作用下PAO1的生长曲线，以此研究DAS对PAO1生长的影响。

2.烯丙基硫醚对铜绿假单胞菌的叶酸合成通路中关键基因表达量的影响