[发明专利]菱的叶子乙醇提取物的制备方法及其应用

说明书

菱的叶子乙醇提取物的制备方法及其应用，涉及蜜蜂的蜜蜂美洲幼虫病防治技术领域。将阴干的菱叶子研磨成粉末后采用乙醇水溶液浸泡，经抽滤，取滤液旋转蒸发，取得菱的叶子乙醇提取物。将该提取物溶解于二甲基亚砜中，用于防治蜜蜂美洲幼虫病。该提取物的使用不存在停药期，在蜂群的整个生产及繁殖阶段均可安全使用，有助于维护蜂群的健康，促进蜂群整体生产力的提高。

技术领域

本发明涉及蜜蜂的蜜蜂美洲幼虫病防治技术领域。

背景技术

蜜蜂是重要的经济昆虫，蜜蜂是传花授粉媒介的重要组成部分,是构成全球生物多样性的重要组成成分,它们对作物、水果和野生植物的授粉活动，使其成为世界范围内最重要的传花授粉昆虫之一，不仅对于农业生产意义重大，更是在维系生物多样性中扮演着重要角色。同时，蜜蜂生产的蜂蜜、蜂花粉、蜂王浆、蜂胶等蜜蜂产品也是重要的保健食品和化工原料。

美洲幼虫病(American Foulbrood，AFB，又称美洲幼虫腐臭病、美洲幼虫腐烂病)，简称美腐病，是一种恶性的蜜蜂幼虫传染病，在世界范围内均有发生。美洲幼虫病与幼虫芽孢杆菌感染有关，该病的发生与幼虫的抵抗力有很大的关系，主要是通过已经感染的蜜蜂饲喂蜂群幼虫，使得该病迅速在蜂群的幼虫间快速传播。通常现代的处置方式是在蜂群确诊该病后需要就地焚烧处理，防止疾病扩散。AFB的病原是幼虫芽孢杆菌(Paenibacilluslarvae)，属于一种革兰氏阳性细菌。蜜蜂幼虫对幼虫芽孢杆菌的敏感性随着日龄的增长而降低，在每个感染的幼虫体内能产生数以亿计的、具有感染能力的孢子，由于其孢子对热和化学物质有极强的抵抗力，可存活长达35年之久，导致AFB感染后，幼虫残骸的鳞片、蜂箱、产品和设备都是潜在的污染源。

目前用于治疗AFB的抗生素很多，如磺胺类药物、盐酸土霉素、四环素、青霉素、链霉素、红霉素、卡那霉素、红霉素、泰乐霉素等，药物通常配用糖浆或者蜜水，勾兑后喷施。每次糖浆和蜜水用量，每脾用100-150mL，间隔4-5d喷施1次。但是，连续使用抗生素有污染蜂产品的可能。为此，用药用量要控制得当，尤其要避开生产季节，防治抗生素在蜂产品中的残留。而且，尽量选择早春或晚秋，治疗效果则会更好些。然而，总体来看，抗生素会在蜂产品中残留，严重影响蜂产品的质量，给人类的健康造成威胁。除此之外，抗生素还会使蜜蜂病原体的耐药性增强，导致病原体产生相应的变异，使得蜂群患病更加严重。

可见，通过使用抗生素对AFB进行防控，往往因超量使用，或者使用抗生素时间不当很容易造成蜂产品中抗生素残留超标，抗生素只能抑制临床症状并不能对孢子发挥作用，且接触了抗生素的幼虫和成蜂，其寿命明显缩短，更严重的是耐药性的产生是导致其对AFB已无法有效地控制主要原因，在全世界范围内给养蜂者造成了巨大的经济损失，与此同时也直接影响了人们食品安全问题。

为了减少养蜂生产中抗生素的使用，人们采用植物进行蜂病的防治。如山西振兴鱼蜂药业公司的纯中药制剂-毒螨菌一次净、甘肃天水汇涛蜂业公司的中草药植物粉剂-健蜂抗螨香粉、山西卫鹏制药有限公司的中草药制剂-蜂康等。不过，目前这些治疗蜂病的产品从种类和疗效上都不能较好满足绿色蜂业的发展需要。还有通过拮抗性细菌发挥生物防控作用，如Evans and Armstrong首次成功地利用培养的P.larvae对幼虫芽孢杆菌引起的AFB进行了生物防控；日本研发的原露技术，对防治蜂病，特别是爬蜂病、大肚病、幼虫病和蜜蜂痢疾等有明显的预防效果，不过其作用谱窄、药效慢、持效短、且易受外界条件的影响。

目前在全世界范围蜜蜂的种群数量逐年递减，在引起蜜蜂种群锐减的诸多因素中，病原体对抗生素产生耐药性，是导致蜂群疾病防控失败的主要原因。随着抗生素类药物的长期使用，蜂群耐药性病菌不断出现，药物抗性问题日显突出，而因为药效逐渐降低、抗生素的用量又不断加大，由此形成了一个恶性循环。

发明内容

本发明目的在于提出一种天然的、能够替代抗生素的植物源的用于防治蜜蜂美洲幼虫病的菱叶子的乙醇提取物。