[发明专利]一种多种病毒核酸联合检测引物与探针组合以及检测试剂盒

权利要求书

1.一种多种病毒核酸联合检测引物与探针组合，其特征在于，所述引物包括：

(1)用于检测新型冠状病毒ORF1ab基因的引物对，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1-2所示；

(2)用于检测甲型H1N1流感病毒matrix(M1)基因的引物对，其核苷酸序列依次如SEQID NO：5-6所示；

(3)用于检测甲型H3N2流感病毒matrix(M1)基因的引物对，其核苷酸序列依次如SEQID NO：9-10所示；

(4)用于检测乙型流感病毒matrix(M1)基因的引物对，其核苷酸序列依次如SEQ IDNO：13～14所示；

(5)用于检测呼吸道合胞病毒matrix基因的引物对，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：17-18所示；

(6)用于检测腺病毒hexon基因的引物对，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：21-22所示；

(7)用于检测副流感病毒hemagglutinin neuraminidase基因的引物对，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：25-26所示；

(8)用于检测内标Rnase P的引物对，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：29-30所示；

靶基因的探针均由两条反向互补的不等长的寡核苷酸链组成，且标记荧光剂的寡核苷酸链与靶基因碱基互补。

2.根据权利要求1所述多种病毒核酸联合检测引物与探针组合，其特征在于，所述探针包括：

(1)用于检测新型冠状病毒ORF1ab基因的探针，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：3-4所示；

(2)用于检测甲型H1N1流感病毒matrix(M1)基因的探针，其核苷酸序列依次如SEQ IDNO：7-8所示；

(3)用于检测甲型H3N2流感病毒matrix(M1)基因的探针，其核苷酸序列依次如SEQ IDNO：11-12所示；

(4)用于检测乙型流感病毒matrix(M1)基因的探针，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：15～16所示；

(5)用于检测呼吸道合胞病毒matrix基因的探针，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：19-20所示；

(6)用于检测腺病毒hexon基因的探针，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：23-24所示；

(7)用于检测副流感病毒hemagglutinin neuraminidase基因的探针，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：27-28所示；

(8)用于检测内标Rnase P的探针，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：31-32所示。

3.根据权利要求2所述多种病毒核酸联合检测引物与探针组合，其特征在于，所述探针中，与靶基因核苷酸链碱基互补的寡核苷酸链的5’端标记荧光剂，3’端需封闭，另一条寡核苷酸链3’端采用淬灭剂封闭。

4.权利要求1至3任意一项所述的多种病毒核酸联合检测引物与探针组合在制备多种病毒核酸联合检测试剂盒中的应用。

5.一种多种病毒核酸联合检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1至3任意一项所述的多种病毒核酸联合检测引物与探针组合。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，用于检测靶基因的探针使用浓度为180-220nM，用于检测内标的探针使用浓度为80-120nM，用于检测靶基因的上下游引物使用浓度为180-220nM，用于检测内标的引物使用浓度为80-120nM。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述联合检测试剂盒还包括PCR缓冲液、酶混合液、空白对照和阳性对照。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR缓冲液的组成为：26-30mol/LpH 8-8.5Tris-HCl，15-25mmol/L(NH₄)₂SO₄，28-32mmol/L KC1，3.5-4.5mmol/L MgCl₂，0.15-0.25mol/L dNTPs。