[发明专利]一种利用ShH10血清型腺相关病毒高效感染猕猴感光细胞的方法

说明书

本发明公开了利用ShH10血清型腺相关病毒(AAV)高效感染猕猴感光细胞的方法，以实现非人灵长类感光细胞外源基因转导，为非人灵长类或人类感光细胞基因调控、基因治疗提供一病毒载体型工具。

技术领域

本发明涉及细胞生物学和基因治疗技术领域。具体而言，本发明涉及利用ShH10血清型腺相关病毒(AAV)高效感染猕猴感光细胞，以实现非人灵长类感光细胞外源基因转导，为非人灵长类或人类感光细胞基因调控、基因治疗提供一病毒载体型工具。

背景技术

色素性视网膜炎(RP)，老年黄斑变性(AMD)等视网膜退行性疾病是高发的遗传性致盲疾病，其由人类单个或多个基因突变，导致视网膜感光细胞死亡，引起视觉严重损伤，最终致盲。视网膜退行性疾病的基因治疗，如CRISPR基因编辑技术等，是希望在视网膜感光细胞中导入基因编辑系统，以修复突变的基因，从而恢复感光细胞的正常功能。但对于此类疾病的基因治疗探索仍处于前期实验阶段，需要大量的实验验证其有效性、安全性，直接在病人身上进行临床实验明显是不现实、不负责任的。而猕猴作为与人类亲缘关系最接近的哺乳动物，其视网膜结构与基因同人类极为相似，是一个非常理想的模式动物。那么，怎样高效、特异地把基因编辑系统导入猕猴视网膜感光细胞，成为了此领域亟待解决的问题。

腺相关病毒(Adeno-Associated Virus，或AAV)是目前美国FDA唯一通过的可用于临床治疗的病毒载体，其结构小，安全性高，对宿主细胞几乎无毒害作用，同时，其与CRISPR基因编辑系统兼容性很好，在科研实验中被广泛使用。但其种类繁多，组织特异性不普适，哪种AAV可以高效、特异地感染猕猴视网膜感光细胞，仍有待发现。

发明内容

本申请发明人通过长期研究发现了一种特定血清型腺相关病毒，其可以高效、特异地感染猕猴视网膜感光细胞，从而可以构建人类视网膜退行性疾病的理想的动物模型，为人类视网膜退行性疾病治疗提供有力工具。具体而言，本发明通过如下技术方案解决了本领域的技术问题。

1.一种将外源基因转染到哺乳动物感光细胞的方法，其包括将腺相关病毒表达载体、辅助载体和任选地报告基因表达载体转染到宿主细胞中并表达和包装为腺相关病毒，并用所述腺相关病毒感染所述感光细胞，所述哺乳动物为优选为灵长类动物，更优选猕猴科，还更优选猕猴属，最优选猕猴种；所述腺相关病毒表达载体优选为衍生自AAV6的腺相关病毒，更优选为ShH10。

2.项目1所述的方法，其中所述报告基因表达载体在所述腺相关病毒表达载体和辅助载体之前、之后或同时转染到宿主细胞中。

3.项目1-2任一项所述的方法，其中所述报告基因为编码绿色荧光蛋白或红色荧光蛋白的基因。

4.项目1-2任一项所述的方法，其中所述宿主细胞为HEK 293T细胞。

5.一种腺相关病毒，其能够特异性感染哺乳动物感光细胞，其中所述腺相关病毒通过将腺相关病毒表达载体、辅助载体和任选地报告基因表达载体转染到宿主细胞中并表达和包装为腺相关病毒得到，所述腺相关病毒表达载体优选为衍生自AAV6的腺相关病毒的表达载体，更优选为ShH10。

6.项目5所述的腺相关病毒，其中所述报告基因表达载体在所述腺相关病毒表达载体和辅助载体之前、之后或同时转染到宿主细胞中。

7.一种组合物，其包含项目5-6任一项所述的腺相关病毒和药学上可接受的载体。

8.一种试剂盒，其包含项目5-6任一项所述的腺相关病毒或项目7所述的组合物。

9.项目5-6所述的腺相关病毒或项目7所述的组合物或项目8所述的试剂盒在感染哺乳动物感光细胞中的用途，所述哺乳动物优选为灵长类动物，更优选猕猴科，还更优选猕猴属，最优选猕猴种。