[发明专利]一种华法林用药基因检测试剂盒及使用方法

说明书

本发明提供一种华法林用药基因检测试剂盒，包括用于检测CYP2C9*2、CYP2C9*3、CYP4F2*3和VKORC1基因待测位点多态性的引物对、探针和抑制剂，PCR反应液、阳性质控品、阴性质控品；所述待测位点为CYP2C9*2(430CT)基因的rs1799853位点、CYP2C9*3(1075AC)基因的rs1057910位点、CYP4F2*3(1297GA)基因的rs2108622位点和VKORC1(‑1639GA)基因的rs9923231位点中的至少一种。本发明还提供了一种华法林用药基因检测试剂盒的使用方法。解决了基因多态性时对样本处理要求高、检测周期长、操作复杂、成本高和特异性不强等问题。

技术领域

本发明应用于基因检测技术领域，具体涉及一种华法林用药基因检测试剂盒及使用方法。

背景技术

华法林是一种双香豆素衍生物类口服抗凝药，通过抑制维生素K在肝脏细胞内合成凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ，从而发挥抗凝作用，在临床上广泛应用于血栓性疾病的预防和治疗。临床实践发现，服用华法林的患者中，每年有15.2％发生出血副作用，其中致命大出血占3.5％。研究表明，主要是因为个体之间药物代谢基因不同，进而导致华法林用药剂量有差异，不同个体之间差异可达20倍以上。

研究发现，华法林的代谢主要和CYP2C9*2(c.430CT)、CYP2C9*3(c.1075AC)、CYP4F2*3(c.1297GA)、VKORC1(-1639GA)这三个基因的四个位点相关。其中，CYP2C9*3还与塞来昔布、洛沙坦等用药相关，CYP4F2*3也与香豆素类抗凝药(醋硝香豆素、苯丙香豆素)等相关。CYP2C9*2和CYP2C9*3突变型编码的代谢酶活性较低，使相应患者口服华法林的抗凝剂量减少。CYP4F2*3(c.1297GA)可导致酶活性降低，导致维生素K浓度升高，华法林的抗凝效果增强，可减少药物用量。VKORC1突变型引起环氧化型维生素K还原成氢琨型维生素K减少，间接影响华法林的抗凝敏感性，突变型只需要很少剂量就能达到抗凝效果，过量反而导致溶血等严重副反应。

目前针对基因多态性检测的技术有很多，最常用的有聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP法)、序列特异性PCR、一代测序、二代测序和基因芯片法等技术，但是这些技术有各自的应用缺陷，有的操作繁琐，检测周期长，无法进行高通量多位点同时检测，使得目前在临床上对于多态性检测技术应用仍不理想，一直无法满足临床检测需求。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的检测CYP2C9*2、CYP2C9*3、CYP4F2*3和VKORC1基因多态性时对样本处理要求高、检测周期长、操作复杂、成本高和特异性不强等问题，提供一种华法林用药基因检测试剂盒及使用方法。本试剂盒具有高灵敏度、低成本、高特异性、操作简便、检测周期短等特点，可以快速精准的对华法林个体化用药基因多态性进行检测。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案实现的：

一种华法林用药基因检测试剂盒，包括用于检测CYP2C9*2、CYP2C9*3、CYP4F2*3和VKORC1基因待测位点多态性的引物对、探针和抑制剂，PCR反应液、阳性质控品、阴性质控品；所述待测位点为CYP2C9*2(430CT)基因的rs1799853位点、CYP2C9*3(1075AC)基因的rs1057910位点、CYP4F2*3(1297GA)基因的rs2108622位点和VKORC1(-1639GA)基因的rs9923231位点中的至少一种。

进一步的，所述检测CYP2C9*2、CYP2C9*3、CYP4F2*3和VKORC1基因待测位点多态性的引物对、探针和抑制剂的核苷酸基因序列如下：

用于检测CYP2C9*2(430CT)引物对、探针和抑制剂的核苷酸基因序列如SEQ IDNO.1到SEQ ID NO.6所示；