[发明专利]流感病毒HA蛋白茎部特异性单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明属于生物技术领域，涉及一种识别流感病毒HA茎部的单克隆抗体、抗原表位、编码基因及其应用。本发明提供一株流感病毒HA茎部特异性单克隆抗体，包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区的核苷酸与氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1‑2所示；轻链可变区的核苷酸与氨基酸序列分别如SEQ ID NO.6‑7所示。该单克隆抗体特异性识别HA蛋白茎部以第431位W、433位Y、437位L为核心基序的抗原表位。该单克隆抗体由H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白作为抗原免疫小鼠得到，亲和力高、敏感性强，与group 1和group 2的流感病毒具有良好的交叉反应性，在流感病毒的广谱免疫学检测方面具有较高的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种流感病毒HA茎部特异性单克隆抗体及其制备方法和应用，属于生物技术领域。

背景技术

A型流感病毒(以下称流感病毒)是造成人与动物流感的重要病原。流感病毒可分为两个群(group 1与group 2)，包含的亚型众多。根据病毒囊膜表面糖蛋白血凝素(HA)与神经氨酸酶(NA)的抗原性差异分为18个HA亚型(H1-H18)与11个NA亚型(N1-N11)。流感病毒为单股正链RNA病毒，基因组分为8个节段。因此，在流感病毒的感染过程中，不同亚型病毒之间的基因重配频繁发生，且在机体的免疫压力下，病毒的HA蛋白会发生位点突变，这两个因素共同造成流感病毒变异速度快、变异特征复杂、基因型与亚型众多等特性。

HA蛋白是位于流感病毒囊膜表面的糖蛋白，在病毒与受体结合与诱导保护性免疫等方面发挥重要的作用。HA蛋白分为头部与茎部两个主要的结构域，头部含有受体结合位点与大部分的抗原表位，在不同亚型病毒之间变异较大，属于HA蛋白的高变区；茎部主要介导细胞融合，在不同亚型病毒之间较为保守，是HA蛋白的保守区。因此，HA茎部也是通用流感疫苗与广谱病毒检测制剂的主要靶点。

单克隆抗体在流感病毒的免疫学检测中发挥越来越重要的作用。由于HA头部含有大部分免疫优势表位，因此目前针对HA蛋白的单克隆抗体大多识别HA头部的单一抗原表位。针对HA头部的单克隆抗体只能特异性识别某一特定亚型的病毒，不具备对其他亚型的交叉反应性，因此检测覆盖面较窄；而HA茎部特异性单克隆抗体识别的是保守表位，能够与不同亚型的病毒反应，在流感病毒的广谱检测方面更有优势。但是，HA茎部含有的抗原表位较少，且大多不是免疫优势表位，因此，获得HA茎部特异性单克隆抗体有一定难度。

发明内容

本发明解决了HA茎部特异性抗体的制备与临床上流感病毒的广谱检测问题，提供一种流感病毒HA茎部特异性单克隆抗体及其制备方法和应用，选用H7N9亚型禽流感病毒的HA蛋白作为免疫原，获得了一株针对HA茎部的单克隆抗体，定位了其识别的抗原表位，测定了编码抗体重链与轻链可变区的序列，且证实该抗体与group 1及group 2的不同亚型流感病毒具有良好的交叉反应性。

为解决上述技术问题，本发明提供一株流感病毒HA茎部特异性单克隆抗体，该抗体包含重链与轻链；所述的重链与轻链均包括可变区，所述的重链可变区的核苷酸序列为以下任一种：

(1)如SEQ ID NO.1所示；

(2)SEQ ID NO.1所示序列的互补序列；

(3)在SEQ ID NO.1所示序列及其互补序列的基础上，经一个或多个核苷酸的缺失、突变、插入得到的编码相似功能蛋白的核苷酸序列；

(4)与SEQ ID NO.1所示序列及其互补序列具有至少70％同源性且编码相同功能蛋白质的核苷酸序列；

所述的重链可变区的氨基酸序列为以下任一种：

(1)如SEQ ID NO.2所示；

(2)在SEQ ID NO.2所示序列的基础上，经一个或多个氨基酸的缺失、替换、插入得到的具有相似功能的氨基酸序列；