[发明专利]流式细胞测定基因组在植物分类中的应用及流式细胞鉴定区分硬叶兰和纹瓣兰的方法

说明书

本发明涉及流式细胞测定基因组在植物分类中的应用及流式细胞鉴定区分硬叶兰和纹瓣兰的方法，属于植物鉴别技术领域。本发明通过利用流式细胞检测基因组大小，来实现植物的分类。具体地，本发明分别对硬叶兰和纹瓣兰的基因组进行流式细胞检测，基因组大小为5250.98～5780.28Mbp的鉴定为纹瓣兰，基因组大小为2582.85～2957.38Mbp的鉴定为硬叶兰。本发明所述方法简便易行，检测结果稳定可靠，能够实现形态上极为相似的硬叶兰和纹瓣兰的高效、快速鉴定。

技术领域

本发明涉及植物学分类技术领域，具体涉及流式细胞测定基因组在植物分类中的应用及流式细胞鉴定区分硬叶兰和纹瓣兰的方法。

背景技术

纹瓣兰(Cymbidium aloifolium)和硬叶兰(Cymbidium mannii)均属于兰科兰属多年生常绿珍稀植物。由于这两种兰花均具有极高的药用和观赏价值而深受人们喜爱。但是这两种兰花在形态上极为相似，因此从传统的分类学上很难将其区别。两者的形态上的相同点大致包括以下五点：1、根和茎相似，都是粗壮，圆柱形而长；2、假鳞茎都包藏在叶基内；3、叶片厚糯，带形，革质，坚挺，略外弯；4、分布地域相同，都分布在云南、贵州、广西、广东等省份，东南亚也有分布；5、生长环境相同，都丛生在疏林中树上或灌木丛或溪谷旁岩壁上，都是附生植物；6、关于香气，二者都有淡香或者无香。目前，可利用RAPD分子标记来区别硬叶兰和纹瓣兰，但是实验流程复杂、成本高、周期长。

发明内容

本发明的目的在于提供流式细胞测定基因组在植物分类中的应用及流式细胞鉴定区分硬叶兰和纹瓣兰的方法。本发明所述方法简便易行，检测结果稳定可靠，能够实现形态上极为相似的硬叶兰和纹瓣兰的高效、快速鉴定。

本发明提供了流式细胞测定基因组在植物分类中的应用。

本发明还提供了一种流式细胞鉴定区分硬叶兰和纹瓣兰的方法，包括以下步骤：

分别对硬叶兰和纹瓣兰的基因组进行流式细胞检测，通过比较基因组大小对硬叶兰和纹瓣兰进行分类。

优选的是，基因组大小为5250.98～5780.28Mbp的鉴定为纹瓣兰，基因组大小为2582.85～2957.38Mbp的鉴定为硬叶兰。

优选的是，所述检测中，内参植物包括玉米和番茄。

优选的是，番茄作为内参植物来测定硬叶兰的基因组大小。

优选的是，玉米作为内参植物来测定纹瓣兰的基因组大小。

优选的是，所述流式细胞检测包括以下步骤：制备样品细胞悬浮液、上机检测和基因组大小计算。

优选的是，所述样品悬浮液的制备方法包括使用MG^b解离液对样品进行解离，得到细胞核悬浮液；将细胞核悬浮液和碘化丙啶溶液、RNAase溶液混合，染色，得到样品悬浮液。

优选的是，所述上机检测采用488nm蓝光激发，每次检测收集10000 个颗粒，变异系数控制在5％以内。

本发明提供了流式细胞测定基因组在植物分类中的应用。本发明采用流式细胞术测定基因组大小，通过比较内参植物荧光强度，计算出待测样品的基因组大小，本发明所述方法简便易行，检测结果稳定可靠，具体能够实现形态上极为相似的硬叶兰和纹瓣兰的高效、快速鉴定。本发明方法同样适用于很难用传统分类学进行鉴定的其他植物物种。

附图说明

图1为本发明提供的番茄和玉米双内参可相互校准图；

图2为本发明提供的硬叶兰的典型直方图；

图3为本发明提供的纹瓣兰的典型直方图。

具体实施方式

本发明提供了流式细胞测定基因组在植物分类中的应用。