[发明专利]一种基于生物炭固定降解菌的土壤修复方法

权利要求书

1.一种基于生物炭固定降解菌的土壤修复方法，其特征在于，包括：

步骤1，取样：采集待修复的土壤样本，并将所述土壤样本置于室温环境中放置保存，所述土壤样本包括含PAM的土壤以及含PAM的污泥；

步骤2，活化：在所述土壤样本中加入液态无机盐培养基，振荡使其活化1天，所述液态无机盐培养基与所述土壤样本的用量比为1g土：3mL无机盐培养基；

步骤3，活化完成后，加入降解材料搅拌均匀，并将处理后的土壤样本在室温条件下放置8天及以上，即可对所述土壤样本中的PAM进行降解；所述降解材料包括生物炭、降解菌与固定化菌中的一种或多种；

所述生物炭是通过以下方法得到的：

步骤a，干燥：将原材料放入烘箱内干燥至含水率低于10 %为止；

步骤b，过滤：分别将干燥的原材料粉碎，并过100 目筛，得到粒径较小的原材料颗粒；

步骤c，炭化：将原材料颗粒混合均匀，送入马弗炉500 ℃热解炭化 45 分钟，得到炭化产物；

步骤d，浸渍：用2.5 mol/L氢氧化钾溶液与冷却后的炭化产物混合均匀，混合均匀后室温放置12小时，使其充分活化;

步骤e，热解活化：缓慢倒掉上层清液，将下层产物送入烘箱烘干，然后在马弗炉800℃的条件下热解活化；

步骤f，洗涤：将冷却后的热解活化产物用3 mol/L盐酸充分洗涤，去除热解活化产物的大部分灰分，然后用纯水漂洗至中性；

步骤g，将洗涤后的产物送入烘箱烘干，即得到所述生物炭；

所述固定化菌是通过以下方法得到的：

步骤a，制备生物炭溶液：将在121℃下灭菌30 min的生物炭与灭菌并冷却后的LB培养液按1 g生物炭加入20mL LB培养液的比例制备生物炭溶液；

步骤b，制备降解菌液：在无菌环境下将甘油保藏的降解菌株接种到LB培养液里，并在35℃，140 r/min的水浴锅中进行培养，培养到降解菌液OD₆₀₀为1.8为止；

步骤c，负载降解菌：将体积为生物炭溶液三倍的降解菌液在3500 r/min下离心10min，并将离心得到的沉淀加入生物炭溶液中在35℃、80 r/min条件下振荡48 h，得到负载上降解菌的生物炭所述降解菌为降解菌PCX，所述降解菌PCX是以PAM为唯一碳源和唯一氮源的克雷伯氏菌属降解菌。

2.如权利要求1所述的一种基于生物炭固定降解菌的土壤修复方法，其特征在于，所述原材料包括植物基原材料和动物基原材料中的一种或两种；所述植物基原材料包括秸秆、椰壳；所述动物基原材料包括鸡粪、污泥。

3. 如权利要求1所述的一种基于生物炭固定降解菌的土壤修复方法，其特征在于，所述生物炭的用量为每克土壤0.05~0.11 g生物炭。

4. 如权利要求1所述的一种基于生物炭固定降解菌的土壤修复方法，其特征在于，所述降解菌的用量为每克土壤0.5×10⁹ ~1.1×10⁹ CFU降解菌。

5. 如权利要求1所述的一种基于生物炭固定降解菌的土壤修复方法，其特征在于，所述固定化菌的用量为每克土壤0.05 g~0.11 g固定化菌。

6. 如权利要求1所述一种基于生物炭固定降解菌的土壤修复方法，其特征在于，所述LB培养液包括10 g/L胰蛋白胨，5 g/L酵母提取物，和10 g/L氯化钠。

7.如权利要求1所述的一种基于生物炭固定降解菌的土壤修复方法，其特征在于，所述液态无机盐培养基包括0.5 g/L氯化钠，0.25 g/L硫酸镁，0.1 g/L氯化钙，0.5 g/L磷酸二氢钠和1.0 g/L磷酸氢二钾。