[发明专利]一种连续制备分离玻璃酸钠的方法

说明书

本发明属于制药领域，具体涉及一种连续制备分离玻璃酸钠的方法。其技术要点如下：通过将玻璃酸钠合成酶固定化在凝胶色谱填料中，将玻璃酸钠酶促反应合成的两个底物氨基己糖和己糖醛酸混合，连续通过固定化酶床层从而制备不同分子量范围的产物玻璃酸钠。本发明通过将玻璃酸钠合成酶（HAase）固定化在凝胶色谱填料中，将玻璃酸钠酶促反应合成的两个底物氨基己糖和己糖醛酸以一定比例混合，连续通过固定化酶床层，制备不同分子量范围的产物玻璃酸钠。由于凝胶色谱具有分子筛分的功能，实现了玻璃酸钠连续的制备和分离，并且可获得窄分子量分布的高品质玻璃酸钠。

技术领域

本发明属于制药领域，具体涉及一种连续制备分离玻璃酸钠的方法。

背景技术

美国哥伦比亚大学的Karl Meyer和John W.Palmer于1934年最先从牛眼玻璃体（hyaloid）中提取分离出玻璃酸钠，其基本结构为糖醛酸（uronic acid）。1937年Kendall等又从细菌体中提取得到了美国哥伦比亚大学的Karl Meyer和John W.Palmer于1934年最先从牛眼玻璃体（hyaloid）中提取分离出玻璃酸钠。1937年Kendall等又从细菌体中提取得到了玻璃酸钠。随着有关玻璃酸钠的研究逐渐深入，人们发现玻璃酸钠具有良好的保湿、润滑、促进组织创伤愈合等生理学功能，可广泛应用于医药、化妆品、美容等多个领域。作为具有较高商业价值的医药、化妆品的重要组成部分，玻璃酸钠的工业化制备一直是人们的研究重点。玻璃酸钠的制备方法有组织提取法、发酵法和化学合成法等，但目前玻璃酸钠的大规模生产仍以动物组织提取和微生物发酵为主。

玻璃酸钠在最早的时候采用动物组织提取法，所有的动物组织中基本上都含有玻璃酸钠，主要是鸡身上的鸡冠和牛身上的牛眼中含有玻璃酸钠最多。将原料放入丙醇和乙醇中去，经行脱脂和脱水，再将脱脂和脱水后的原料放入蒸馏水中进行浸泡，然后再用氯化钠对其进行处理，再加入胰蛋白酶，最后再利用离子交换法提炼出精制的玻璃酸钠。由于在动物的组织中提炼的玻璃酸钠的提取率是非常低的，而且提取的过程也比较复杂，成本比较高，这就导致所提取的玻璃酸钠的价格比较昂贵，限制了玻璃酸钠提取产业的可持续发展。

当前玻璃酸钠的主要生产工艺为微生物发酵法，其通过微生物细胞内的玻璃酸钠合成酶以氨基己糖和己糖醛酸作为底物进行合成。但将发酵后的产物玻璃酸钠从发酵液中分离出来一直以来是工艺上的难点。

有鉴于上述现有的玻璃酸钠的制备方法中存在的缺陷，本发明人基于从事此类产品设计制造多年丰富的实务经验及专业知识，并配合学理的运用，积极加以研究创新，以期创设一种玻璃酸钠的制备方法，通过将玻璃酸钠合成酶（HAase）固定化在凝胶色谱填料中，将玻璃酸钠酶促反应合成的两个底物氨基己糖和己糖醛酸以一定比例混合，连续通过固定化酶床层，制备不同分子量范围的产物玻璃酸钠，显著增加了玻璃酸钠的稳定性和收率。经过不断的研究、设计，并经反复试作样品及改进后，终于创设出具实用价值的本发明。

发明内容

本发明的技术目的是提供一种连续制备分离玻璃酸钠的方法，实现了玻璃酸钠连续的制备和分离，并且可获得窄分子量分布的高品质玻璃酸钠。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

本发明提供的一种连续制备分离玻璃酸钠的方法，通过将玻璃酸钠合成酶固定化在凝胶色谱填料中，将玻璃酸钠酶促反应合成的两个底物氨基己糖和己糖醛酸混合，连续通过固定化酶床层从而制备不同分子量范围的产物玻璃酸钠。

进一步的，玻璃酸钠先从色谱柱中流出，杂质小分子后从色谱柱中流出。

进一步的，玻璃酸钠的分子量是(8~20)×10⁵、(40~100)×10⁵、(100~200)×10⁵或(200~500)×10⁵Da。

进一步的，氨基己糖和己糖醛酸混合摩尔比是5:1~1:5。