[发明专利]一种快速检测沙门菌并鉴定鸡白痢/鸡伤寒沙门菌的PCR检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供一种快速检测沙门菌并鉴定鸡白痢/鸡伤寒沙门菌的PCR检测试剂盒及其应用。申请人通过针对cigR基因设计引物，采用PCR检测技术进行cigR基因检测，根据扩增及检测情况可分析判断检测对象是否属于沙门菌或是否为鸡白痢/鸡伤寒沙门菌。于一具体方案中，检测试剂盒中至少包括SEQ ID NO.1所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的反向引物。本申请中的试剂盒简单快速、特异性好、灵敏度高且重复性好。

技术领域

本发明涉及一种生物检测试剂盒，特别是涉及一种快速检测沙门菌并鉴定鸡白痢/鸡伤寒沙门菌的PCR检测试剂盒及其制备和应用。

背景技术

沙门菌病是公共卫生学上有重要意义的人兽共患病之一，其病原沙门菌属于肠杆菌科，家畜，家禽及蛋肉制品是主要传播媒介，它不但可引起多种畜禽疾病，造成全身性败血症和肠炎，还可以作为食源性疾病的病原体，引起人类胃肠炎和食物中毒。鸡白痢和鸡伤寒分别是由鸡白痢沙门菌(Salmonella Pullorum)和鸡伤寒沙门菌(SalmonellaGallinarum)引起的。鸡白痢沙门菌，又称雏沙门菌，可引起禽的鸡白痢，多侵害3周龄以内的幼雏，发病率和病死率较高；成年鸡亦可被感染，常导致母鸡产蛋减少，生殖道畸形，体质量下降，也导致孵化率和出雏率明显下降且可长期带菌与排菌。禽伤寒是因感染鸡伤寒沙门菌而导致的急性或慢性败血性禽类传染病，表现出腹泻、厌食、精神不振等症状，鸡伤寒沙门菌对雏鸡、成年鸡均可致病，以引起贫血、白细胞增多、出血为特征。在全球范围内影响着养鸡业的发展，在我国颇为严重。目前，根据Kauffman-White(K-W)血清型分型方法，依据沙门菌菌体抗原及鞭毛抗原的不同，沙门菌的血清型有2600种以上，中国已报道了292种不同的血清型，分属于35个O群。

传统的检测方法即非选择性和选择性增菌、生化特性及血清学鉴定很费力、耗时，需4-7 天才能完成，而其它方法如抗体检测法，虽然快速，但其高假阳性使之不适于常规检测。此外，低水平的病原菌污染，食品加工后导致沙门菌的“致伤”及食品其它成分的干扰等因素，使得沙门菌的检测受到一些限制。

因此，急需一些快速、特异、敏感的检测方法，以及时有效地防控沙门菌。

发明内容

针对现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于提供一种快速检测沙门菌并鉴定鸡白痢/鸡伤寒沙门菌的PCR检测试剂盒及其制备和应用。

发明人发现cigR基因仅存在于沙门菌，而鸡白痢和鸡伤寒沙门菌cigR基因相较于其它血清型沙门菌cigR缺少中间的核苷酸片段，即鸡白痢和鸡伤寒沙门菌中没有，根据cigR基因的分布特点可将鸡白痢和鸡伤寒沙门菌区分开。在此基础上发明人设计了相关的检测试剂盒。

为了实现上述目的及其他相关目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种快速检测沙鸡白痢/鸡伤寒沙门菌的PCR检测试剂盒，所述试剂盒中包括cigR基因检测引物。

优选地，所述cigR基因检测引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的反向引物。可扩增出一条目的条带(421bp)的泳道为鸡白痢或鸡伤寒沙门菌，扩展出一条目的条带(463bp)的泳道为非鸡白痢/鸡伤寒的其它沙门菌。

优选地，所述试剂盒中还包含如SEQ ID NO.3所示的反向引物。通过这一引物的加入可以更加方便的检测出非鸡白痢和鸡伤寒沙门菌，形成多重PCR检测方案。可扩增出一条目的条带(421bp)的泳道为鸡白痢或鸡伤寒沙门菌，扩展出两条目的条带(463和65bp)的泳道为非鸡白痢/鸡伤寒的其它沙门菌，没有扩增出条带的泳道表示没有沙门菌。

本发明的试剂盒采用PCR检测技术进行cigR基因检测，根据扩增及检测情况可分析判断检测对象是否属于沙门菌或是否为鸡白痢/鸡伤寒沙门菌。因此，引物的设计是本发明试剂盒的关键。