[发明专利]重组人源Ⅰ型胶原蛋白在制备促进创面愈合材料中的应用

说明书

本发明公开了一种重组人源Ⅰ型胶原蛋白在制备促进创面愈合材料中的应用。所述的重组人源Ⅰ型胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ No.2所示，含有510个氨基酸，理论分子量约55.911kd，构建的重组人源Ⅰ型胶原蛋白表达菌株能够有效稳定和大量地表达重组人源Ⅰ型胶原蛋白。本发明的重组人源胶原蛋白具有良好的亲水性及稳定性，其结构与天然胶原蛋白基因序列相应部分100％相同，应用于人体当中不会造成免疫排斥，作为促进创面愈合材料具有起效时间短、创面愈合速度快的优点，适用于生物医用材料和化妆品领域。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种重组人源Ⅰ型胶原蛋白((RHCⅠ))在制备促进创面愈合材料中的应用。

背景技术

创面的修复愈合是一个复杂、动态的生物学过程。愈合包括了止血、炎症反应、肉芽组织再生以及基质重塑四个步骤。愈合过程顺利进行是确保皮肤修复以及功能恢复的重要前提，其中肉芽组织和上皮再生在创面愈合中的作用至关重要。

胶原蛋白(Collagen)是脊椎动物体内最重要的结构蛋白，约占蛋白总量的25～30％。作为细胞外基质中含量最丰富的蛋白，胶原蛋白是结缔组织和几乎所有薄壁器官间隙组织中最主要的结构蛋白，起着稳定组织和器官并维持其结构完整的作用。研究表明，胶原蛋白应用于创面具有强效的抗感染能力，能够促进细胞生长、黏附、止血和伤口愈合。作为细胞外基质(ECM)主要结构成分，胶原蛋白含量最多并且相互聚合、连接，并参与组织器官形态发生、代谢更新、损伤修复。胶原蛋白应用于创面可通过促进ECM内细胞募集以及纤维蛋白的合成等加速创面愈合，因此胶原蛋白的表达和分解直接影响创面愈合速度。正常皮肤组织中的胶原蛋白分为Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白。Ⅰ型胶原蛋白主要分布于皮肤细胞外间质，具备引导上皮细胞迁入缺损区的功能，同时在细胞迁移过程中起到支持和润滑作用。另外，Ⅰ型胶原纤维相对粗大的特性，更决定了新生皮肤组织的抗拉性和创面愈合成熟程度。

目前，应用于创面修复的胶原蛋白主要来源于动物。但天然动物胶原蛋白分子量大小不等，性质非常复杂，存在的动物病毒隐患在应用过程中无法彻底消除。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组人源Ⅰ型胶原蛋白在制备促进创面愈合材料中的应用。本发明将重组人源胶原蛋白应用于创面愈合修复，克服了动物胶原蛋白的缺陷，具有无病毒隐患、无免疫原性和良好的水溶性以及生物相容性的优点。

本发明所述的重组人源Ⅰ型胶原蛋白在制备促进创面愈合材料中的应用，所述的促进创面愈合材料可以是促进创面愈合的组合物，如与抑菌材料等复配制成促进创面愈合的药物组合物；或促进创面愈合的敷料等。

在本发明的具体实施方式中，所述的促进创面愈合材料中，重组人源Ⅰ型胶原蛋白的浓度为0.1％(w/v，g/mL)。本发明所述的重组人源Ⅰ型胶原蛋白，氨基酸序列如SEQ No.2所示。

本发明所述的重组人源Ⅰ型胶原蛋白的编码基因Iα1 510aa，核苷酸序列如SEQNo.3所示。

本发明构建的重组人源Ⅰ型胶原蛋白质粒ppic9K-Iα1 510aa的核苷酸序列如SEQNo.4所示，通过将重组人源Ⅰ型胶原蛋白的编码基因Iα1 510aa双酶切连接至ppic9K载体的EcoR I和Not I间构建而成。

本发明构建的分泌表达重组人源Ⅰ型胶原蛋白的菌株为巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris JY0201，保藏编号为CGMCC No.16461，该菌种已于2018年9月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。所述的巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris JY0201通过将Sac I酶切得到的线性化重组人源Ⅰ型胶原蛋白质粒ppic9K-Iα1 510aa诱导入巴斯德毕赤酵母中构建而成。