[发明专利]一种中药多糖提取物抵抗重金属生殖毒性效果的评价方法

权利要求书

1.一种中药多糖提取物抵抗重金属生殖毒性效果的评价方法，其特征在于，包括：

使秀丽线虫分别暴露于空白组、对照组和受试组培养基中，根据秀丽线虫总后代数、怀卵数、生殖细胞凋亡数、后代生长生殖状况评价中药多糖提取物对重金属生殖毒性的效果；所述秀丽线虫暴露时为L1期线虫，终点评价时为L4期线虫；所述大肠杆菌为E. coli OP50；

所述评价具体为：

受试组与对照组相比终点指标无差别时，P0.05，判定中药多糖提取物对抵抗重金属生殖毒性无影响；

受试组与对照组相比终点指标有差别，P0.05，且该指标值属于空白组与对照组指标值构成的开区间时，判定中药多糖提取物对重金属生殖毒性有缓解作用；

受试组与对照组终点指标值相比有差别，P0.05，该指标值不属于空白组与对照组指标值构成的开区间，且该指标值更接近空白组指标值时，判定中药多糖提取物对重金属生殖毒性有消除作用；

受试组与对照组终点指标值相比有差别P0.05，该指标值不属于空白组与对照组指标值构成的开区间，且该指标值更接近对照组指标值时，判定中药多糖提取物对重金属生殖毒性有加剧作用；

所述空白组的培养基包括缓冲液和大肠杆菌；

所述对照组的培养基包括缓冲液、大肠杆菌和重金属离子；

所述受试组的培养基包括缓冲液、大肠杆菌、中药多糖提取物和重金属离子;

所述中药多糖提取物为葛根多糖；所述多糖的终浓度为50～200 mg/L；

所述重金属离子包括镉离子；所述镉离子的终浓度为0.05～10μM。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲液为K液；所述K液包括1～4 g/L的KCl和/或1～4 g/L的NaCl。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述秀丽线虫总后代数具体按照以下步骤得到：秀丽线虫生长至L4期后，将秀丽线虫用缓冲液冲洗并转移至固体培养基中，培养基放置线虫待其自然生产后代，计数板上幼虫及卵个数，并将亲代线虫转移到新鲜固体培养板，重复计数和转移操作，直到线虫不再产生后代，幼虫数及卵数的总和为总后代数。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述线虫怀卵数具体按照以下步骤得到：秀丽线虫生长至L4期后，将秀丽线虫用缓冲液冲洗并转移至固体培养基中，恢复12～24小时后，用裂解液裂解线虫，观察并记录每条线虫体内卵个数；

所述裂解液为0.5～5 M NaOH和20～100％ NaClO的混合溶液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生殖细胞凋亡具体按照以下步骤得到：秀丽线虫生长至L4期后，将秀丽线虫用缓冲液冲洗并转移至固体培养基中，以染色剂染色30～60分钟后，在荧光显微镜下观察并记录生殖腺中细胞凋亡个数；所述染色剂为吖啶橙；

所述后代生长生殖情况具体按照以下步骤得到：秀丽线虫生长至L4期后，将秀丽线虫用缓冲液冲洗并转移至含有食物固体培养基中，对亲代线虫同步化得到后代线虫，后代线虫用含有食物的缓冲液培养，成长至L4期时进行体长测量以及总后代数测量。

6.秀丽线虫在评价葛根多糖对重金属引起的生殖毒性中的应用；所述评价方法为权利要求1~5任意一项所述的方法。