[发明专利]一种凝结芽孢杆菌菌粉芽孢的检测方法

说明书

本发明公开了一种凝结芽孢杆菌菌粉芽孢的检测方法，涉及微生物检测技术领域，包括如下步骤：(1)将待测的凝结芽孢杆菌菌粉样品加入到含有吐温80的带玻璃珠的无菌生理盐水中，于恒温震荡器上均质，制成样品匀液；(2)汲取均质后的所述样品匀液进行水浴加热，加热完成后取出冷却至室温得到样品待测液；(3)将所述样品待测液进行10倍梯度稀释，取适宜稀释梯度的样品待测液进行培养，观察，检测。本发明通过对样品均质稀释用的生理盐水添加一定浓度的吐温80进行改良试验，在不影响样品生长活性条件下，起到了有效的分散样品菌粉芽孢的作用。

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，特别涉及一种凝结芽孢杆菌菌粉芽孢的检测方法。

背景技术

凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)是一类能形成芽孢的产乳酸细菌。1989年，美国食品与药物管理局(FDA)将其列入可用于饲料的安全菌株。2016年食品安全标准与检测评估司发出的《关于发酵乳杆菌CECT5716等3个菌种的公告》里将凝结芽孢杆菌列入《可用于食品的菌种名单》，凝结芽孢杆菌除了具有一般乳酸菌的维持肠道微生态平衡，刺激免疫，抑制致病菌，提高机体健康水平，提高人和动物消化功能等作用外，同时由于其能产生芽孢，具有抗逆性强、耐胃酸、耐胆盐、抗干燥、耐高温高压和易贮存等独特的生物特性，其广泛应用于各种功能食品中，如意大利面，巧克力和咖啡粉等。

目前，凝结芽孢杆菌的研究已成为益生菌菌株研究的热点。然而，它的检测方法还没有相应的国标出现，目前主要依赖于传统的微生物芽孢杆菌检测方法。由于凝结芽孢杆菌不同于普通的芽孢杆菌：它能产凝结素，从而容易导致在检测菌粉芽孢时不容易分散，检测数据不准确和重复性低等问题。因此，提供一种准确有效的检测方法显得尤为重要。

发明内容

本发明提供一种凝结芽孢杆菌菌粉芽孢的检测方法，解决现有的检测方法不容易分散，检测数据不准确和重复性低等问题。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：

一种凝结芽孢杆菌菌粉芽孢的检测方法，包括如下步骤：

(1)将待测的凝结芽孢杆菌菌粉样品加入到含有吐温80的带玻璃珠的无菌生理盐水中，于恒温震荡器上均质，制成样品匀液；

(2)汲取均质后的所述样品匀液进行水浴加热，加热完成后取出冷却至室温得到样品待测液；

(3)将所述样品待测液进行10倍梯度稀释，取适宜稀释梯度的样品待测液进行培养，观察，检测。

优选的，所述凝结芽孢杆菌菌粉样品占含有吐温80的无菌生理盐水质量百分比为1-10％。

优选的，所述吐温80占无菌生理盐水质量百分比为0.1-1％。

优选的，所述玻璃珠直径为3-5mm。

优选的，步骤(1)中所述恒温震荡器的旋转频率为250rpm；均质时间为10-30min；均质温度为15-25℃。

优选的，步骤(2)中水浴加热温度为70-80℃，水浴加热时间为10-30min。

采用上述技术方案，本发明通过对样品均质稀释用的生理盐水添加一定浓度的吐温80进行改良试验，在不影响样品生长活性条件下，起到了有效的分散样品菌粉芽孢的作用，进而能够达到准确检测凝结芽孢杆菌菌粉芽孢数的效果；通过水浴加热使得凝结芽孢杆菌菌粉样品中的营养体失活，芽孢得以保留，在检测中有效的检出芽孢数；本发明的检测方法简单，制备操作方便，检测结果准确，可重复性高。

附图说明

图1为本实施例中对照组吐温80浓度为0的均质震荡后的样品待测液的显微镜图；

图2为本实施例中试验组1吐温80浓度为0.2％的均质震荡后的样品待测液的显微镜图；