[发明专利]生物发光法监测污染水体的方法

说明书

本发明属于生物环境监测技术领域，公开了生物发光法监测污染水体的方法，其包括如下步骤：步骤1）配置复壮培养液，步骤2）发光菌复壮，步骤3）污水监测。本发明生物发光法监测污染水体快速、灵敏，市场应用前景广阔。

技术领域

本发明属于生物环境监测技术领域，具体涉及生物发光法监测污染水体的方法。

背景技术

近年来，随着工业化进程的提高以及对化工产品的极大需求，各种化学物质数量猛增，给人类生存环境造成很大影响，迫切需要对日益增多的环境污染物进行急性毒性鉴定。环境监测方法可以划分为两类: 理化分析技术和生物监测。其中理化分析技术常常用于单一理化指标的测试，但不能反应污染物毒性的大小。传统的生物监测以水蚤、藻类或鱼类等为受试对象，虽然能反映毒物对生物的直接影响，但是这些方法的最大缺点是实验周期长，实验比较繁琐。针对传统生物毒性检测方法的不足，发光细菌法作为一种新型生物毒性监测技术正在广泛应用，引起了广大环保科研工作者的关注。

发光细菌法是利用灵敏的光电测量系统测定毒物对发光细菌发光强度的影响。发光细菌含有荧光素、荧光酶等发光要素, 在有氧条件下通过细胞内生化反应而产生微弱荧光。采用发光细菌法监测水体污染物已经逐渐应用到实际工作中。

文献CN109946433A公开了一种污水检测方法包括：在污水排放处采取污水样品，将部分污水样品用二氯甲烷萃取，然后用DMSO溶解，放入冷箱中低温保存，再将部分污水样品采用发光细菌毒性试验对污水样品进行检测；如果未检测出污水具有毒性时，则可以直接将污水进行回收再利用；如检测出污水具有毒性时，在污水口处均匀的喷洒污水处理剂并且再次取样检测；如果检测出污水具有毒性时，则对放入冰箱中的污水样品进行深度检测，如果未检测处污水具有毒性时，则可以对该污水进行回收再利用。

文献CN108507999A公开了一种应用于生物技术中生物毒性检测方法，包括如下步骤：目标水体取样；制备微生物菌液；生物毒性检测。通过发光细菌对目标水体进行检测，发光细菌生物毒性试验相对于水蚤生物毒性试验、藻类毒性试验和鱼类毒性试验，具有周期短、准确度好、监测范围宽、检测场所任意的优点。

在实际操作中，发光菌一般是以冻干粉的形式保存，使用时进行复苏复壮，而该过程决定着菌株的数量和活力的恢复，复苏工艺不当会造成菌株大量死亡从而造成亮度不够难以进行毒性测试，而且复苏培养液中的组分可能会对菌株发光会造成一定的影响。现有技术中常用的菌株有青海弧菌、费氏弧菌、明亮发光杆菌、鳆发光杆菌等，但是，不同的发光菌由于分类学和理化性质的不同，复苏以及培养工艺也存在较大的差异。

现有技术对发光菌的复苏复壮培养有一些记载。

文献CN102465097A，通过开发专门的细菌复苏溶液，包括无机组分(如氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钾等)和有机组分(包括胰蛋白胨、酵母浸膏、氨基酸、甘油、维生素、葡萄糖等)。但是该复苏溶液并没有具体组分的配比关系，无法进行实际应用。

文献CN102604873A公开了一种海洋发光细菌的复壮方法，复壮培养基主要组分含有酪蛋白水解酶2-8g/L，甘油磷酸钠20-25g/L，酵母膏2.5g/L。该复壮培养基主要针对明亮发光杆菌、费氏弧菌，并不适合鳆发光杆菌。

文献CN101874105A公开了一种介质组合物，该组合物包括：1.0-3.0％的NaCl/KCl、0.5-7.0％的肌糖/乳糖/海藻糖/葡聚糖、0.0-300mM的Mg/Ca、0.01-0.05％的酵母提取物/酸水解酪素、0.02-1.0％的牛血清白蛋白/卵白蛋白和0.1-3.5％的乙醇/甲醇/丙醇；将发光细菌悬液贮存在用于维持发光细菌存活并防止细菌扩张的条件下2周。该保存液主要目的是维持菌株活力，但是在应用中的实际意义并不大，在实际操作中，一般需要对冻干粉进行复苏复壮，在复苏复壮过程中，快速恢复菌体发光活力，减少菌体死亡，使得发光菌能够在最短的时间内应用于环境中污染物的监测。

发明内容