[发明专利]一种融合型Taq DNA聚合酶及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 202010634495.9 | 申请日： | 2020-07-02 |
| 公开（公告）号： | CN111690626B | 公开（公告）日： | 2021-03-26 |
| 发明（设计）人： | 曹林;聂俊伟;瞿志鹏;张力军;吴恒;韩锦雄;江明扬 | 申请（专利权）人： | 南京诺唯赞生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12;C12N15/54;C12Q1/70;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 210046 江苏省南京市经济技*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 融合 taq dna 聚合 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种融合型Taq DNA聚合酶，其特征在于，所述融合型Taq DNA聚合酶由Taq DNA聚合酶突变体和DNA结合蛋白组成；
所述DNA结合蛋白连接于所述Taq DNA聚合酶突变体的羧基端；
所述Taq DNA聚合酶突变体为SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；
所述DNA结合蛋白为SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；
所述融合型Taq DNA聚合酶为SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。
2.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子为编码权利要求1所述的融合型Taq DNA聚合酶的DNA片段；
所述核酸分子为SEQ ID NO:4所示的核酸序列。
3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括权利要求2所述的核酸分子。
4.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括权利要求3所述的表达载体。
5.根据权利要求4所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞的基因组中整合有权利要求2所述的核酸分子。
6.一种权利要求1所述的融合型Taq DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将权利要求2所述的核酸分子连接入质粒，转入感受态细胞，培养后挑取单克隆细胞进行筛选；
(2)提取筛选的阳性克隆的表达载体，转入宿主细胞，诱导培养并收集上清液，分离纯化得到所述融合型Taq DNA聚合酶。
7.一种RT-qPCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的融合型Taq DNA聚合酶。
8.根据权利要求7所述的RT-qPCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括所述融合型Taq DNA聚合酶的抗体。
9.根据权利要求7所述的RT-qPCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括逆转录酶。
10.根据权利要求7所述的RT-qPCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括引物对、荧光探针、荧光染料、dNTPs或PCR缓冲液中的任意一种或至少两种的组合。
11.一种非诊断目的的RT-qPCR方法，其特征在于，所述方法包括采用权利要求7-10中任一项所述的试剂盒对生物样本和/或生物样本RNA进行检测的步骤。
12.一种权利要求1所述的融合型Taq DNA聚合酶、权利要求2所述的核酸分子、权利要求3所述的表达载体、权利要求4或5所述的宿主细胞或权利要求7-10中任一项所述的试剂盒在制备RNA病毒检测试剂中的应用。
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