[发明专利]一种快周期油菜在油菜功能基因研究领域的应用及方法

权利要求书

1.一种快周期油菜在油菜功能基因组学研究领域的应用，其特征在于：

所述快周期油菜为完成一个生命周期很短的一种甘蓝型油菜(Brassica napus)，其在22℃、16小时光/8小时暗培养条件下，从出苗到成熟周期仅约60天；

所述功能基因研究包括基因编辑和/或基因突变体的制备。

2.一种基于快周期油菜进行油菜基因编辑的方法，其特征在于，所述方法采用所述快周期油菜作为供体进行目标基因的编辑，外植体接种后80天左右即可收获基因编辑子代，具体包括如下步骤

(1)取所述快周期油菜的种子进行表面消毒后播种，制备得到外植体，备用；

(2)根据目标基因的序列结构，构建基因编辑载体，并转化大肠杆菌感受态细胞；

(3)将得到的大肠杆菌感受态细胞与农杆菌电击融合后，以所得农杆菌液浸染步骤(1)中获得的外植体；

(4)将浸染过所述农杆菌液的外植体转到M1培养基中，置于22℃暗室进行共培养36-48h；

(5)将步骤(4)培养后的外植体从M1培养基转移到M2培养基中，并于22℃进行光照培养2周；

(6)将培养后的外植体转入到M3培养基中，经常规培养形成小苗；

(7)对选定的编辑位点进行测序，确定为阳性单株的小苗移栽到温室进行培养，成活后按常规苗管理，即得。

3.根据权利要求2所述基于快周期油菜进行基因编辑的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，所述M1培养基包括如下含量的成分：MS成品粉末4.4g，蔗糖30g，D-甘露糖醇18g，2,4-二氯苯氧乙酸1mg，激动素0.3mg，Phytagel 5.5g，ddH₂O定容至1L，调节pH值5.88；高温灭菌后加入乙酰丁香酮100μmol，混合均匀。

4.根据权利要求2或3所述基于快周期油菜进行油菜基因编辑的方法，其特征在于，所述步骤(5)中，所述M2培养基包括如下含量的成分：MS成品粉末4.4g，蔗糖30g，D-甘露糖醇18g，2,4-二氯苯氧乙酸1mg，激动素0.3mg，Phytagel 5.5g，ddH₂O定容至1L，调节pH值5.86；高温灭菌后加入硫代硫酸银150μl及特美汀300mg，硫酸卡那霉素25mg。

5.根据权利要求4所述基于快周期油菜进行基因编辑的方法，其特征在于，所述步骤(5)中，所述光照培养中，控制光照条件为16小时光照/8小时黑暗。

6.根据权利要求2-5任一项所述基于快周期油菜进行基因编辑的方法，其特征在于，所述步骤(6)中，所述M3培养基包括如下含量的成分：MS成品粉末4.4g，蔗糖30g，Phytagel5.5g，ddH₂O定容至1L，调节pH值5.84-5.88；高温灭菌后加入特美汀300mg。

7.根据权利要求2-6任一项所述基于快周期油菜进行基因编辑的方法，其特征在于，所述步骤(7)中，所述培育步骤的培养条件为22℃、16小时光/8小时暗。

8.一种基于快周期油菜制备功能基因突变体的方法，其特征在于，所述方法采用所述快周期油菜作为供体，进行诱变处理，具体包括如下步骤：

(1)取所述快周期油菜的种子M0进行浸水吸胀预处理，备用；

(2)将所述快周期油菜进行诱变处理，获得快周期M1种子，备用；

(3)将所得快周期M1种子播种于培养间，筛选突变表型自交获得快周期M2种子，备用；

(4)将所述快周期M2种子继续播种于培养间，验证其突变表型是否可遗传，并收集突变株继续自交，获得M3突变株；

(5)取所述M3突变株种成家系，无分离的突变株系继续自交，即可获得纯合的M4突变体。

9.根据权利要求8所述基于快周期油菜制备功能基因突变体的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述诱变步骤包括化学诱变和/或物理诱变。

10.根据权利要求8所述基于快周期油菜制备油菜基因突变体的方法，其特征在于，所述步骤(3)、(4)、(5)中，控制培养条件为：温度22℃，光照16小时光/8小时暗。