[发明专利]一种从液体硅胶中快速提取孕激素的方法及检测方法

说明书

本申请属于孕激素产品质量控制领域，具体涉及一种孕激素快速提取方法及提取试剂盒和孕激素快速检测方法。一种孕激素快速提取方法，该方法取混合了孕激素的液体硅胶加入到硅油提取试剂中，硅油提取试剂的粘度为10‑100 cps，使其充分溶解，然后使用高速离心机离心，然后弃去上清液，获得孕激素沉淀物。然后采用HPLC外标法进行检测，即可定性、定量液体硅胶中的孕激素。本申请的方法操作简单，回收率高，无高危操作环节，适合一般的实验室检测。

技术领域

本申请属于孕激素产品质量控制领域，具体涉及一种孕激素快速提取方法及提取试剂盒和孕激素快速检测方法。

背景技术

孕激素，最常见的为黄体酮，其主要的的靶器官为生殖器官。孕酮在雌性动物中主要作用于子宫内膜，一方面刺激并维持子宫内膜和子宫腺的增长，另一方面降低子宫内膜上孕酮、雌二醇和OT(缩宫素)三种激素的受体水平。孕酮抑制子宫雌二醇和OT受体，使子宫处于静止状态；孕酮抑制子宫上自身受体，使得孕酮对子宫的上述作用随着黄体期的持续而逐渐下降。

孕激素在畜牧业中的一个作用是用于母畜的同期发情(为什么要进行同期发情？在自然情况下，雌性动物在繁殖季节里出现的发情是随机的、零散的。所谓的同期发情(sychronization of estrus)，就是采用激素或类激素的药物处理，使一群母畜在特定的时间内集中发情和排卵。这一技术目前已经广泛地应用于母牛、母猪的批次化生产中，是家畜繁殖中最重要的技术)，该技术自20世纪60年代诞生以来，衍生出了很多方法，主要原理是应用孕激素及其类似物，经口服、皮下注射、埋植、阴道栓等方法，停药后2～6天药物抑制卵巢的作用消失，母畜便能同期发情。在停用孕激素后也可以配合注射促性腺激素或雌激素，以促使被处理母畜发情表现明显，达到排卵的目的。

而孕激素类兽药产品中以孕激素阴道缓释剂的技术含量最高(研制难度，生产难度，检测难度)，其主要借助于硅胶这种基质，将孕激素与硅胶(液体硅胶)按照一定比例混合后，采用模制成型工艺生产出来。这一类产品通常放置于阴道或埋植使用，使用期间，孕激素或类似物可以从硅胶层中缓慢释放(按照特定的释放速率)出来，从而发挥药效(人工模拟黄体期。即抑制母畜发情)，孕激素撤出或停用后，抑制作用消失，母畜便又出现发情(卵巢上的卵泡同时也发育成熟到排卵)。

同期发情技术中的孕激素产品，特别是孕激素硅胶缓慢释放装置(缓释剂)在生产期间，涉及到产品质量控制环节(液体硅胶(高粘度，水的粘度为1cps)与孕激素按照一定的比例混合，如何检测液体硅胶中的孕激素是否混合均匀，如何快速准确地检测液体硅胶中孕激素的准确含量，是一直以来存在的问题(如果孕激素在硅胶中无法混合均匀，则采用模制成型出来的产品含量均匀度无法保证，会出现部分产品含量超过上限，部分产品含量低于下限，以及批次间产品差异较大，临床实用中，药效不稳定，无法重复等问题))。

如中国发明专利申请(申请号:CN201711083232.8)公开了一种同时检测环境水体中多种孕激素的方法，该方法包括以下步骤：1)水样预处理；2)新型固相萃取吸附剂OasisPRiME HLB富集浓缩；3)UPLC-MS/MS测定孕激素浓度；4)标准曲线的绘制及上机测定，采用新型固相萃取吸附剂Oasis PRiME HLB作为环境水样的预处理技术，并且以超高液相-质谱连用仪为检测定量工具，同时测定了水环境中11种不同孕激素。

上述的方法可以高选择性和高灵敏度结合孕激素，但是该方法操作复杂。如果可以直接快速提取并检测液体硅胶中孕激素的含量，这样方法操作简单，回收率高，也能适合一般的实验室检测。

发明内容

为了解决加有孕激素的液体硅胶中孕激素含量的快速准确定性、定量的难题，本申请提供了一种孕激素快速提取方法，该方法操作简单，回收率高，无高危操作环节，适合一般的实验室检测。

为了解决上述的技术问题，本申请采用了以下的技术方案：