[发明专利]白蚁SelT基因及其dsRNA结合金龟子绿僵菌在白蚁防治中的应用

说明书

本发明公开了一种黑胸散白蚁SelT基因dsRNA结合金龟子绿僵菌在白蚁防治中的应用。所述的黑胸散白蚁SelT基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:1；基于SEQ ID NO:1，设计引物扩增PCR获得SelT基因片段SEQ ID NO:6，根据扩增片段SEQ ID NO:6设计含T7启动子的引物合成相应的dsRNA。将合成的特异性dsRNA注射入白蚁体内；注射dsRNA的无菌白蚁主动接触直接感染绿僵菌的未注射白蚁，获得少量绿僵菌孢子成为受菌同伴白蚁；受菌同伴白蚁的抗菌活性和存活率显著下降，表明受菌同伴白蚁的主动免疫被打破，注射dsSelT显著提高了绿僵菌对白蚁的防治效果。本发明获得的SelT基因可作为白蚁防治的分子靶标，与金龟子绿僵菌结合使用，有效提高白蚁防治效果，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种黑胸散白蚁SelT基因及其dsRNA结合金龟子绿僵菌在白蚁防治中的应用。

背景技术

SelT是主要定位于细胞内质网和高尔基体的硫氧还蛋白样酶，不仅涉及内分泌胰腺的结构完整性，而且参与血糖稳态，并发挥调节Ca²⁺稳态和氧化还原稳态等多种功能。沉默SelT基因有助于病原菌对秀丽隐杆线虫的侵染，影响线虫对伤害性刺激的反应。因此，SelT可能是降低宿主免疫力的有效靶标基因。

社会性昆虫白蚁已有2.5亿年的生活史，因其分布范围广、适应力强，具有构筑地下巢穴、取食木材和纤维制品等习性，不仅对人们的日常生活带来了严重困扰，也给国民经济造成了重大损失。目前，喷施化学农药和使用毒饵诱杀是防治白蚁的主要手段，但随之而来的环境污染等问题不容忽视。近年来，随着科研人员对白蚁致病菌的深入研究，开发和利用致病菌防治白蚁具有广阔的应用前景。

金龟子绿僵菌是应用最为广泛的真菌杀虫剂之一，可制备成原粉剂、粉剂、可湿性粉剂、乳剂等剂型用于防治害虫。室内试验表明，用1×10⁸孢子/mL浓度的金龟子绿僵菌孢子悬浮液处理白蚁后，第5 d出现死亡，18 d后死亡率100%（见《湖北农业科学》，2006，45(1)：62-64）。但是野外试验表明，群体生活的白蚁能够通过理毛、隔离和埋尸等一系列的卫生行为和生理免疫机制来干扰和抑制绿僵菌的侵染过程（见《Journal of EconomicEntomology》，2008，101(3)：885-893），这大大降低了绿僵菌对白蚁的防治效果。正是因为白蚁群体进化出多种社会免疫策略（如主动免疫：健康个体通过接触染菌个体获得亚致死剂量的分生孢子，激活自身免疫系统提高免疫力），导致单一的绿僵菌生物制剂对野外白蚁的防治效果不理想。因此，打破和瓦解白蚁群体抵御绿僵菌侵染的社会免疫策略是提高绿僵菌防治白蚁效果的关键所在。鉴于此，本发明提供了一种黑胸散白蚁SelT基因及其dsRNA结合金龟子绿僵菌来防治白蚁，相比于单纯使用绿僵菌生物制剂，本发明可以瓦解白蚁群体的社会免疫，显著提高绿僵菌对白蚁的防治效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够瓦解白蚁巢群免疫防御机制的靶标基因SelT及其dsRNA，并结合金龟子绿僵菌来防治白蚁。