[发明专利]一种基于连续流动分析仪测定烟草中总黄酮含量的方法

说明书

本发明公开了一种基于连续流动分析仪测定烟草中总黄酮含量的方法。采用连续流动分析仪在510nm波长处检测，以亚硝酸钠‑硝酸铝作为显色剂，并配制氢氧化钠溶液，标准工作曲线方程为y＝0.0022x+0.0017，相关系数r²＝0.9998，将样品溶液所对应的总黄酮仪器测定值代入公式计算，即可得到待测烟草中的总黄酮含量。本发明首次将连续流动分析仪应用于烟草中总黄酮含量的测定。该方法的回收率在96.83％～104.4％之间；5个样品在不同时间、不同批次检测的变异系数均小于5％；检出限和定量限分别为0.025mg/g和0.082mg/g。本发明操作简便、分析速度快，重复性、稳定性和准确性均较好，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于烟草理化指标检测技术领域，具体是涉及一种基于连续流动分析仪对烟草中总黄酮含量进行快速准确测定的方法。

背景技术

烟草作为我国重要的经济作物，近年来，随着中国签署《烟草控制框架公约》，意味着烟草的发展空间受到了很大的限制，使得生产优质烟叶，降低有害成分，提高烟草产品的品质，成为现阶段一个重要的课题。烟草的生长发育和烟叶的品质受温度、海拔、光照、土壤、水分等多种因素的影响，目前黄酮类化合物已被证实是影响烟草品质重要的潜香型物质，其代谢受多种因素调控。因此研究黄酮类化合物代谢途径及其调节机制对提高烟叶品质具有重要意义，故烟草中总黄酮含量的准确测定显得极其重要。

已报道用于总黄酮化合物含量测定的方法主要为高效液相色谱法，但该方法使用的设备昂贵、检测成本高、检测周期长，而且需要专业人士操作，因此难以普及。

连续流动分析仪不仅设备便宜、维护成本低，且具有前处理简单、上机操作简便、检测速度快、定量准确、重现性好等优势，在检测中不需要使用有机试剂，对环境更友好。我国烟草行业自上世纪八十年代引进连续流动分析仪以来，已进行了烟草及烟草制品中水溶性糖、总植物碱、总氮、总挥发酸、淀粉、游离态烟碱等化学成分的检测，也有采用连续流动分析仪进行卷烟纸中氯、钾、硝酸盐等的检测，但目前还未见有运用连续流动分析仪检测烟草中总黄酮含量的报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种基于连续流动分析仪实现的，快速、简便、精确度高的测定烟草中总黄酮含量的方法。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

除非另有说明，本发明所采用的百分数均为质量百分数。

一种基于连续流动分析仪测定烟草中总黄酮含量的方法，具体采用以下步骤：

(1)准确称取1.0g烟末置于150mL具塞三角瓶中，加入80％乙醇溶液100mL，摇匀后盖紧塞子放在振摇器上，以150r/min振荡萃取30min，用定性滤纸过滤萃取液，收集滤液作为样品溶液备用；

(2)用连续流动分析仪分析：

①配制亚硝酸钠试剂：称取亚硝酸钠5.00g，用800mL去离子水溶解，然后定容至1000mL；

②配制硝酸铝试剂：称取10.00g硝酸铝，用800mL去离子水溶解，然后定容至1000mL；

③配制氢氧化钠试剂：称取40.00g氢氧化钠溶于800mL去离子水中，然后定容至1000mL；

④分析仪流路设置：样品溶液用黄/黄泵管，流速为1.20mL/min；亚硝酸钠试剂用黑/黑泵管，流速为0.32mL/min；硝酸铝试剂用黑/黑泵管，流速为0.32mL/min；氢氧化钠试剂用红/红泵管，流速为0.78mL/min；清洗液用红/红泵管，流速为0.78mL/min；氢氧化钠试剂加入后，样品溶液与三种试剂的混合物再经80匝反应混合圈充分混匀显色后，进入检测器；检测波长：510nm；检测速度：30个样品/h；进样/清洗时间比：1:1；基线校正：开通；漂移校正：开通；