[发明专利]一种烧伤创面多重耐药细菌感染的实验方法

说明书

本发明涉及医疗技术领域，尤其为一种烧伤创面多重耐药细菌感染的实验方法，包括以下步骤：A、体内、体外条件下自由基引发剂修饰的功能化石墨烯纳米复合材料靶向细菌作用研究；B、体内、体外条件下自由基引发剂修饰的功能化石墨烯纳米复合材料光热诱导靶向抗菌作用研究；C、自由基引发剂修饰的功能化石墨烯纳米复合材料对多重耐药细菌感染创面愈合的影响及其作用机制研究；D、自由基引发剂修饰的功能化石墨烯纳米复合材料生物安全性研究。本发明为在更复杂条件下光动力治疗和光热疗法的应用提供了更多的选择，为烧伤创面多重耐药细菌感染提供新的治疗方向和策略，并有利于进一步探索用于多重耐药细菌治疗新的多功能纳米平台。

技术领域

本发明涉及医疗技术领域，具体为一种烧伤创面多重耐药细菌感染的实验方法。

背景技术

控制创面多重耐药细菌感染是临床上救治重度烧伤患者主要环节之一，传统的实验方法中涉及大量抗生素的应用，不仅会使得细菌耐药性大幅提高，而且会严重伤害患者身体健康。

现有国内外在这方面的研究现状及趋势主要集中于采用自由基代替传统的实验方法，但在研究及实验中依然存在一定的问题，具体问题有以下几点：

1、在单独治疗时，通常所需的辐照强度会高于皮肤承受温度，由此导致的局部高温可能会对附近的健康组织造成严重损害，因而研制克服光动力治疗和光热治疗缺点的新型医用纳米生物材料是下一步工作的重点；

2、在生理温度下，偶氮引发剂分解产生的烷自由基诱导细胞凋亡是有限的，需要有效的光热剂来加速自由基的产生；

3、现有的纳米生物材料在光热转换效率方面依旧存在较大缺陷。

发明内容

本发明的目的在于提供一种烧伤创面多重耐药细菌感染的实验方法，具备为烧伤创面多重耐药细菌感染提供新的治疗方向和策略的优点，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种烧伤创面多重耐药细菌感染的实验方法，包括以下步骤：

A、体内、体外条件下自由基引发剂修饰的功能化石墨烯纳米复合材料靶向细菌作用研究：①纳米材料在体外与细菌靶向结合作用，②纳米材料在体内向感染部位靶向聚集作用；

B、体内、体外条件下自由基引发剂修饰的功能化石墨烯纳米复合材料光热诱导靶向抗菌作用研究：①采用标准平板计数法、活/死细菌染色法检测纳米材料体外靶向抗菌能力，②建立小鼠多重耐药细菌皮下脓肿模型、创伤感染模型，尾静脉注射纳米材料后观察纳米材料光热诱导靶向抗菌效果，并对脓肿及感染组织进行菌落计数定量分析；HE染色分析脓肿部位组织愈合情况；

C、自由基引发剂修饰的功能化石墨烯纳米复合材料对多重耐药细菌感染创面愈合的影响及其作用机制研究：①采用电子自旋共振技术检测纳米材料烷自由基生成，采用电子自旋共振技术检测纳米材料与细菌结合后烷自由基的生成，采用电子自旋共振技术检测纳米材料在正常氧气及无氧条件下烷自由基的治疗机制，②在正常氧气及无氧条件下活性氧水平检测、谷胱甘肽水平检测以及DNA损伤检测，探究烷自由基导致细菌氧化应激反应的分子生物学作用，③采用免疫组化、免疫印迹手段探究创面愈合相关分子的表达变化情况以及与此过程密切相关的细胞信号转导途径；

D、自由基引发剂修饰的功能化石墨烯纳米复合材料生物安全性研究：①纳米材料与3T3成纤维细胞共培养24小时后，通过CCK-8法检测3T3成纤维细胞的增殖情况，②通过溶血实验检测纳米材料血液相容性，③将纳米材料经小鼠尾静脉注射后1天及30天，观察小鼠各主要脏器、血液系统是否出现病理性损伤变化，探究其急性和慢性毒性作用。

优选的，所述步骤A中具体流程如下，

多重耐药细菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、多重耐药铜绿假单胞菌)解冻后摇匀，在细菌培养至对数生长期时收集，使用时调整细菌OD600nm＝0.48；