[发明专利]靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体及应用

说明书

本发明公开了一种靶向RBD的高中和活性抗SARS‑CoV‑2全人源单克隆抗体，所述抗体通过流式分选‑单细胞PCR技术筛选获得，具有独特的CDR序列，本发明还公开了所述抗体在制备2019‑冠状病毒病治疗药物中的应用。本发明公开的单克隆抗体具有高效、特异的抗SARS‑COV‑2病毒活性，还具有高表达、全人源、稳定性好的特点，适合产业化生产。

技术领域

本发明公开了一种抗体，属于微生物学和免疫学领域。

背景技术

目前，已知引起人致病的冠状病毒包括7种，其中HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63和HCoV-HKU1致病性较低，一般引起轻微的呼吸道症状。另外三种引起严重的疾病。SARS-CoV引起严重呼吸窘迫综合征(SARS)，MERS冠状病毒引起中东呼吸综合征，SARS-CoV-2(新型冠状病毒)引起COVID-19(新冠肺炎)。

SARS-CoV-2属冠状病毒科(Coro-naviridae)冠状病毒属(Coronavirus)，是一类有包膜的单股正链RNA病毒。基因组全长为30kb，依次由5＇-端非编码区、非结构蛋白开放阅读框(ORF)1a/b编码区、刺突糖蛋白S编码区、包膜蛋白E编码区、膜蛋白M蛋白编码区、核衣壳蛋白N蛋白编码区及3＇-端非编码区组成。其中，非结构蛋白ORF1a/b区编码的聚蛋白可被切割，形成RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)等，指导病毒基因组复制、转录和翻译。结构蛋白S可特异性地与宿主细胞的受体结合，是病毒入侵宿主易感细胞的关键蛋白。不同冠状病毒可利用不同的细胞受体来完成入侵，如SARS-CoV的受体是血管紧张素转化酶2(ACE2)，而MERS-CoV的受体是氨基肽酶4(DPP4，也称CD26)。研究证明，氨肽酶N不是SARS-CoV-2的受体，而ACE2可作为其受体。

基因测序结果显示，SARS-CoV-2与SARS-CoV的同源性约79％,与MERS-CoV的同源性约50％。文献报道，新型冠状病毒S蛋白ACE2亲和力较SARS-COV强，提示具有更强的传染性。到目前为止，还没有专门用于预防的疫苗和治疗冠状病毒的特效药物。一般采用非特异性治疗，预防严重的并发症，降低重症发病率和病死率，提高治愈率。研发新型冠状病毒病的疫苗和特异治疗药物成为全球应急科研攻关的重要任务。

新冠肺炎治疗方法中，康复者血浆疗法在治疗重症患者中显示了良好的效果，提示抗体在治疗新冠肺炎上的巨大潜力。单克隆抗体成分单一、易规模化制备、抗病毒机制明确，是新冠肺炎治疗药物研究的重要方向。本发明拟采用单细胞PCR技术从SARS-CoV-2感染者恢复后的外周血中获得具有高亲和力和优异中和活性的单克隆抗体，目的是提供针对COVID-19具有良好保护效果的全人源单克隆治疗性抗体。

发明内容

基于上述发明目的，本发明通过流式分选-单细胞PCR技术筛选到了一种抗SARS-CoV-2的单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1第26-33、51-58、97-111位氨基酸序列所示；轻链可变区的CDR1、CDR2和CDR3区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:5第27-35、52-54、91-100位氨基酸序列所示。所述单克隆抗体在本申请中被命名为“4B7”。

在一个优选的实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

在一个更为优选的实施方案中，所述抗体的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示，所述轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9所示。

第二，本发明还提供了一种编码上述单克隆抗体重链和轻链的多核苷酸，编码所述抗体的重链可变区的多核苷酸序列由SEQ ID NO:2所示，编码所述抗体的轻链可变区的多核苷酸序列由SEQ ID NO:6所示。