[发明专利]一种花生耐盐基因及其应用

说明书

本发明属于生物基因工程技术领域，具体公开了一种花生耐盐基因及其应用，所述花生耐盐基因的核苷酸序列为SEQ ID No.1，所述花生耐盐基因的氨基酸序列为SEQ ID No.2，以花生幼嫩叶片的DNA为模板，利用引物AhNAC65‑F2和AhNAC65‑R2进行PCR扩增，并构建AhNAC65a的过表达载体，用于拟南芥遗传转化，分析并鉴定转基因拟南芥的耐盐性变化，发现转AhNAC65a基因的拟南芥耐盐性显著提高。该发明为植物耐盐遗传改良提供了基因资源，对分析花生NAC转录因子的多样性功能，具有重要的理论意义和应用价值。

技术领域

本发明属于生物基因工程技术领域，具体涉及一种花生耐盐基因及其应用。

背景技术

花生(Arachis hypogaea L.)是我国重要的油料作物，是重要的植物油脂和蛋白质来源。目前，我国自产的食用油远不能满足全国人民的消费需求。因此，扩大花生种植面积对保障食用油脂安全具有举足轻重的作用。然而，油料作物与粮食作物争地的矛盾日益突出。我国现有盐碱地面积约9913万hm²，占世界盐碱地面积的26.3％，具有农业开发潜力的大约有667万hm²。选育耐盐碱花生品种，增大盐碱地花生种植面积，是解决我国“粮油争地”矛盾，保障食用油脂安全的一个有效途径。耐盐基因的挖掘是花生抗性育种的基础。因此，耐盐基因的功能鉴定及分子机制研究，对借助转基因技术或分子辅助育种选育耐盐碱花生品种，从而提高盐碱地利用效率具有重要意义。

目前，花生中已经明确具有耐盐功能的基因尚少。亟需挖掘鉴定花生耐盐基因，为花生分子辅助育种提供基因资源和理论基础。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，利用转基因技术，将AhNAC65a转到拟南芥中，得到转AhNAC65a基因拟南芥，该基因的转入能提高转基因拟南芥的耐盐性。该发明提供了一种花生耐盐基因及其应用。

本发明提供了一种花生耐盐基因，所述花生耐盐基因的核苷酸序列为SEQIDNo.1，所述花生耐盐基因的氨基酸序列为SEQIDNo.2。

进一步的，所述耐盐基因的开放阅读框为861bp，共编码286个氨基酸。

本发明还公开了一种花生耐盐基因的应用，以花生幼嫩叶片的DNA为模板，利用引物AhNAC65-F2和AhNAC65-R2进行PCR扩增，构建AhNAC65a的过表达载体，用于拟南芥遗传转化，分析并鉴定拟南芥的耐盐性。

进一步的，所述引物AhNAC65-F2和AhNAC65-R2的序列分别为TGGAGAGAACACGGGGGATCCATGGAAGGAAGTAGTAAAAG和CGATCGGGGAAATTCGAGCTCTTAGTAATATCCTCTTAAATCA。

进一步的，所述PCR扩增体系为ddH2O、含Mg2+的缓冲液、dNTP、AhNAC65-F2、AhNAC65-R2、DMSO、Phusion酶和基因组DNA模板。

进一步的，所述PCR扩增引物的反应条件为：90～98℃预变性30s；95～98℃变性10s，50～58℃退火10s，65～75℃50s，30个循环；65～75℃后延伸10min。

进一步的，所述花生耐盐基因在盐胁迫处理后在花生中表达量上升。

进一步的，所述花生耐盐基因可应用于提高转基因拟南芥的耐盐性。

进一步的，所述花生耐盐基因可应用于提高转基因花生、大豆、棉花植物的耐盐性。

与现有技术相比，本发明的优点和技术效果是：利用转基因技术，将花生耐盐基因AhNAC65a转到拟南芥中，得到了转基因拟南芥耐盐效果显著提高的功效，对植物耐盐性的研究提供了基因资源，具有重要的理论意义和应用价值。

附图说明

图1为本发明所述的盐胁迫下AhNAC65a基因在根中表达情况柱形图。