[发明专利]一种基于UPLC法对追风透骨胶囊中马兜铃酸Ⅰ含量检测的方法及样品前处理方法

说明书

本发明公开了一种基于UPLC法对追风透骨胶囊中马兜铃酸Ⅰ含量检测的方法及样品前处理方法，该方法通过采用液液萃取和固相萃取相结合的方式对追风透骨胶囊样品进行前处理，其中液液萃取为调酸萃取，不仅可有效防止制样过程中乳化现象的产生，还能有效避免上样液堵固相萃取小柱，同时还保证了马兜铃酸Ⅰ的回收率，达到了很好的除杂效果。本发明进一步结合UPLC对追风透骨胶囊中的马兜铃酸Ⅰ含量进行分析，通过特定的前处理和色谱检测条件，使得马兜铃酸Ⅰ在液相色谱中能得到有效的分离，分离度达到1.5以上，且杂质干扰极少，能够有效、简便、精准地对追风透骨胶囊的马兜铃酸Ⅰ含量进行检测，进而确保追风透骨胶囊临床用药安全性和稳定性。

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，更具体地，涉及一种基于UPLC法对追风透骨胶囊中马兜铃酸Ⅰ含量检测的方法及样品前处理方法。

背景技术

追风透骨胶囊为国家食品药品监督管理局标准收载的品种。由制川乌、细辛、地龙等二十四味中药组成，具有通经络、祛风湿、镇痛祛寒等功效，并用于风寒湿痹、四肢痹痛、手足麻木等。其中，细辛中含有慢性肾损害性成分马兜铃酸Ⅰ，长期服用会导致晚期肾衰竭。因此，追风透骨胶囊中的马兜铃酸Ⅰ的限量检测对控制该产品制剂的质量、保证临床用药安全等方面具有重要意义。

由于追风透骨胶囊的成分复杂，检测过程中的干扰物质多，且马兜铃酸Ⅰ的含量又非常的低，因此，在使用仪器对追风透骨胶囊样品进行痕量检测之前，必须对样品进行前处理，以除去样品中的干扰成分。

目前追风透骨胶囊中马兜铃酸Ⅰ检测的样品前处理方法一般为调碱萃取，例如现有技术中(吕情花,追风透骨胶囊中马兜铃酸A的限量检查,中国现代药物应用2015年8月第9卷第15期,285-286页)报道了追风透骨胶囊的样品前处理方法，具体包括将样品经甲醇提取、碱化后用氯仿除去杂质、酸化后氯仿提取，用甲醇溶解定容，以消除其他物质对马兜铃酸A的干扰。然而，该方法在调碱萃取制样过程中很容易出现样品乳化现象，导致样品无法进入检测环节，造成时间和资源的双重浪费。

因此，有必要提供一种追风透骨胶囊马兜铃酸Ⅰ分析检测的样品前处理方法，并进一步地应用于追风透骨胶囊的马兜铃酸Ⅰ含量检测中，以有效的控制追风透骨胶囊的质量，进一步确保临床用药的安全性和稳定性。

发明内容

本发明的首要目的是克服上述现有技术中的缺陷和不足，提供一种基于UPLC法对追风透骨胶囊中马兜铃酸Ⅰ含量检测的样品前处理方法。

本发明的又一目的是提供一种基于UPLC法对追风透骨胶囊中马兜铃酸Ⅰ含量检测的方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种基于UPLC法对追风透骨胶囊中马兜铃酸Ⅰ含量检测的样品前处理方法，包括以下步骤：

S1.液液萃取：将追风透骨胶囊内容物和稀释剂混合，超声，冷却，再加入稀释剂补重，分离，取适量上清液并挥干得到残渣A，再向残渣A中加入纯化水，用稀盐酸调至pH值为1～2，氯仿萃取，收集氯仿层，水浴挥干溶剂，得到残渣B，再向残渣B中加入稀释剂，得到备用液；

S2.固相萃取：将S1中的备用液加至固相萃取柱上，洗脱，收集洗脱液，水浴挥干溶剂，得到残渣C，再向残渣C中加入稀释剂，摇匀，分离得到供试品溶液；

其中S1和S2中所述稀释剂为甲醇。

本发明人采用传统的调碱萃取和固相萃取结合的方式进行前处理时，制样过程中会经常产生样品乳化现象，且固相萃取柱出现堵柱现象；当仅采用固相萃取进行前处理时，固相萃取柱堵柱现象严重，容易导致固相萃取柱报废，且制样时间一般需要24小时以上。