[发明专利]DNA条形码序列及其鉴定枸杞种属的方法

说明书

本发明公开了DNA条形码序列及其鉴定枸杞种属的方法，属于枸杞种属鉴定技术领域。本发明利用枸杞的psbH‑petB的DNA条形码鉴定枸杞品种、确定枸杞种间关系的方法，同时在该方法基础上获得psbH‑petB条形码数据库，通过将待鉴定样品的psbH‑petB序列与所述psbH‑petB条形码数据库中的序列进行比对，能够有效地对枸杞种属进行鉴定，并确定枸杞的种间关系，为枸杞品种提供有效的依据。

技术领域

本发明属于枸杞种属鉴定技术领域，具体涉及DNA条形码序列及其鉴定枸杞种属的方法。

背景技术

宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)是我国名贵的道地药材，具有抗氧化、抗肿瘤、软化血管、降脂、降糖、生精、保肝、明目、增强人体免疫力等功效。由于道地药材与非道地药材常有相同的基原或为近缘，使得它们在外在形态、习性、组织构造及所含化学成分等方面具有高度的相似性，传统的鉴定方法难以作出准确鉴别。

DNA条形码(DNA barcoding)是利用一个或少数几个DNA片段对目标物种进行识别和鉴定的一项新技术，它具有操作简便、准确性高、鉴定快速等特点，已成为现代生物类学研究中引人注目的新方向和研究热点。但是目前枸杞属的条形码数据库在物种丰富度及数量上都相对欠缺，仍需进行大量的研究。近些年来，国内外学者对适合用于鉴定植物的DNA条形码基因序列进行了积极的探索与研究。

公开号为CN106282390A的发明专利《宁夏枸杞和枸杞SNP快速鉴定方法》，公开了一种宁夏枸杞和枸杞SNP快速鉴定方法，其包括如下步骤：1)以待测样品DNA为模板，扩增含有SEQ ID No.1所示的序列；2)对扩增产物进行测序，分析SEQ ID No.1所示的序列，如果自SEQ ID No.1所示序列的5’端起第97位、第173位为C，第200位为G，则鉴定为宁夏枸杞，如果自SEQ ID No.1所示序列的5’端起第97位、第173位为T，第200位为A，则鉴定为枸杞。本发明能够实现宁夏枸杞、枸杞原植物、药材和生饮片的快速、准确鉴定。

文章《基于nrDNAITS序列对枸杞雄性不育材料的鉴别》，公开了对7份常规枸杞种质和1份枸杞雄性不育材料的DNA中nrDNAITS(核糖体DNA基因内转录间隔区)序列进行分析,从分子水平对枸杞雄性不育材料作出鉴定。采用改进CTAB法提取枸杞叶片DNA,利用合成的特异引物对其DNA中nrDNAITS区进行扩增、克隆,对目的片段测序分析。结果显示首次测序得到了枸杞雄性不育材料和其他7份常规枸杞种质的nrDNAITS区碱基序列,整个ITS序列长度559～633bp,平均为612bp,共有160个变异位点,占25.3％；保守位点473,占74.7％；67个转换位点和31个颠换位点。表明基nrDNAITS区序列分析可作为鉴定枸杞雄性不育材料的一种新的鉴别方法。

但现有技术中，仍然存在枸杞优异资源挖掘和利用滞后、枸杞种质资源遗传背景不清、种间关系不明等问题，同时仍然缺乏针对不同地区、不同种质来源的多品种进行统一的快速鉴定方法。

发明内容

本发明针对现有技术中枸杞优异资源挖掘和利用滞后、枸杞种质资源遗传背景不清、种间关系不明、对于外在形态、习性、组织构造相近的枸杞种属无法区分等问题，特别针对于枸杞属的条形码数据库在物种丰富度及数量上都相对欠缺等问题，依托国内唯一的枸杞种质资源圃和在长期开展枸杞新品种选育获得的育种材料的基础上，同时提供了黑果枸杞、黄果枸杞、圆果枸杞、红枝枸杞等品种，宁夏枸杞地方品种、四川、北方、新疆、云南、河北等地方品种以及杂交群体、航天诱变群体、倍性群体等不同枸杞来源中具有代表性种质的枸杞的分子标记快速鉴定方法，可应用于枸杞种属的鉴定。

本发明的目的是提供利用DNA条形码鉴定枸杞品种、确定枸杞种间关系的方法，同时在该方法基础上获得psbH-petB条形码数据库，通过将待鉴定样品的psbH-petB序列与所述psbH-petB条形码数据库中的序列进行比对，能够有效地对枸杞种属进行鉴定，并确定枸杞的种间关系，为枸杞品种提供有效的依据。