[发明专利]一种利用p53强化清除受损干细胞种子的方法

说明书

提供了一种利用p53强化清除受损干细胞种子的方法，将组织破碎过程中受损的干细胞种子消除，提高了干细胞种子质量。

技术领域

本发明涉及干细胞培养领域，尤其是涉及一种利用p53强化清除受损干细胞种子的方法。

背景技术

干细胞种类很多，已经在疾病治疗、医美、抗衰、药物筛选等众多领域大量应用。干细胞培养已经成为整个干细胞产业链发展的制约瓶颈，干细胞培养器已经成为干细胞培养领域的开发热点。按干细胞培养装置的特点，分为2D培养与3D培养两大类。2D培养主要通过在培养皿中，批量换液、扩散法供气来实现小批量生产。3D培养主要在立体容器中完成，可以自主调控培养液的组成，可以主动向培养液供气，对培养过程的调控手段更丰富。无论是传统的2D培养，还是正在快速发展的3D培养，都面临干细胞种子质量问题，核心体现在缺少对干细胞种子的选择手段，种子制备过程中受损的干细胞种子与未受损的干细胞种子无法区分，只能一同培养，影响了干细胞产品的质量。

发明内容

针对上述不足，本发明提供一种利用p53强化清除受损干细胞种子的方法 ，其实质是利用p53在干细胞增殖过程的细胞周期检查点功能，将损伤的、变异的干细胞种子及时清除，只允许未受损的干细胞种子能够正常繁殖，直接在干细胞繁殖过程中实现未受损干细胞种子的筛选，消除受损的干细胞种子。

本发明解决干细胞种子筛选问题，利用p53强化清除受损干细胞种子的方法的具体要求步骤如下：

S1 按标准操作进行干细胞种子获取与培养的相关前期工作；

S2 通过理化手段增强p53表达，在高表达p53条件下进行干细胞种子增殖；

S3干细胞种子的检测与保存。

有益效果：

本发明设计了一种利用p53强化清除受损干细胞种子的方法 ，p53高表达使受损伤的干细胞无法正常增殖并进入细胞凋亡周期，只保留未受损伤的干细胞种子正常增殖，有效提高了干细胞种子质量。

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

本发明提供了一种利用p53强化清除受损干细胞种子的方法，步骤包括以下内容：

S1 将脐带剪碎，按标准实验操作将剪碎脐带置于培养皿中，加入MSC细胞种子培养液；将培养皿放入37ºC，5% CO₂的培养箱中，进行2D方式的干细胞培养；

S2 取细胞进行p53表达量检测，以此为对照；更换添加人参皂苷Rg3的MSC细胞种子培养液培养，进行p53表达量检测，保证p53表达量是对照的1.2倍及以上，在此培养液中进行MSC干细胞种子增殖；

S3 利用倒置显微镜观察MSC干细胞种子增殖，及时更换培养液，保证MSC干细胞种子增殖；

S4 用酶解法将MSC干细胞种子从培养皿中分离出来，进行相关的检测，保存。

MSC干细胞种子检测结果 ：CD29/CD44/CD73/CD90/CD105的阳性率超过95%，（控制表达的特征抗原）CD34\CD45\CD14\CD31\CD19\HLA阳性率 2%，符合MSC干细胞指标要求；

p53定量检测：按文献（李盈淳,汤志远,吴梦秋,王广基,郝海平.细胞内p53蛋白LC-MS/MS定量方法及其应用[J].中国药科大学学报,2012,43(06):519-525）的方法进行p53定量检测，设备为SCIEX 5500+（LC-MS-MS，带离子阱）。

实施例2

本发明提供了一种利用p53强化清除受损干细胞种子的方法，步骤包括以下内容：

S1 将脐带剪碎，按标准实验操作将剪碎脐带置于3D培养系统中，培养系统预先加入了MSC培养用微载体，加入MSC细胞种子培养液，进行37ºC，5% CO₂的干细胞3D培养；