[发明专利]一种联合利用hFDSPCs-CM和HA促进糖尿病创面愈合的方法

说明书

本发明公开了一种联合利用hFDSPCs‑CM和HA促进糖尿病创面愈合的方法，联合利用包皮来源的真皮干细胞条件培养基和透明质酸促进糖尿病创面愈合，首次将包皮来源的真皮干细胞/祖细胞的条件培养基联合透明质酸应用于糖尿病鼠模型，与目前广泛应用的脂肪干细胞条件培养基相对比，具有更好的促进创面愈合的效果，尤其是在促进胶原合成方面有着明显优势，对临床治疗糖尿病难愈创面有着重要意义，同时操作简单有望在未来实现临床转化。本发明提供了包皮来源的真皮干细胞/祖细胞的条件培养基促进糖尿病创面愈合的相关数据，并且在体内体外实验中探究了相关机制。

技术领域

本发明涉及一种联合利用hFDSPCs-CM和HA促进糖尿病创面愈合的方法。

背景技术

糖尿病创面是临床常见的棘手问题，其特点是趋化因子和血管化不足，成纤维细胞迁移和增殖减少，以及异常的炎症反应。目前的针对该问题的常规治疗方法包括了定制辅料、外科清创、负压治疗以及抗生素和高压氧治疗等。但是，仍有近50％患者无法通过传统治疗方法治愈。

近年来大量研究证明了多种组织来源的间充质干细胞可以促进糖尿病创面愈合，例如：骨髓、脂肪、脐带血和皮肤组织。虽然不同组织来源的间充质干细胞有一定的相似性，但是在不同微环境中有不同的特征。并且已有研究证实了在体外实验中真皮干细胞比脂肪干细胞在促进创面愈合过程中更有优势。值得关注的是，包皮作为一种临床废弃组织，具有丰富的来源、容易获取以及无伦理争议的特点，具有作为临床应用间充质干细胞来源的的巨大潜能。

目前认为间充质干细胞促进创面愈合主要是靠旁分泌途径分泌丰富的“蛋白质组”包括：生长因子、miRNA、蛋白酶体和细胞外囊泡等。这些成分比细胞疗法更适合临床应用，因为它们规避了与细胞疗法相关的安全和伦理问题。

细胞外囊泡在创面治疗取得了较好的效果，但是制备过程繁琐限制了其进一步的应用。相比之下，条件培养基(conditionedmedium，CM)优势更加突出，如成本更加经济，制备过程更加简易，可以获得等效甚至更强效的产品。除CM外，创面敷料对创面愈合也有重要的作用。其中，透明质酸(hyaluronic acid，HA)作为一种皮肤中的天然成分，无毒副作用同时可以在局部有效传递CM中的活性成分，同时已经成为一种成熟的产品便于使用，因此，非常适合作为皮肤创面敷料。

目前多种组织来源的间充质干细胞条件培养基已经展现了对糖尿病创面愈合的促进作用。而包皮组织作为间充质干细胞的可靠来源同时具有来源广泛无伦理问题，在未来临床应用中有巨大潜力。同时相比于细胞外囊泡的复杂制备过程，条件培养基操作简单，同时更加经济，获得的蛋白质组成分更加丰富。

到目前为止，尚无研究报道人包皮来源的真皮干细胞/祖细胞条件培养基(humanforeskin-derived dermal stem/progenitor cells conditioned medium，hFDSPCs-CM)联合HA对糖尿病创面的作用效果。同时，由于人类脂肪来源干细胞条件培养基(Humanfat-derived stem cells conditions medium，hADSCs-CM)广泛应用于糖尿病创面治疗，选择hADSCs-CM作为阳性对照。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种联合利用hFDSPCs-CM(包皮来源的真皮干细胞条件培养基)和HA(透明质酸)促进糖尿病创面愈合的方法，评估该方法对于促进糖尿病创面愈合的作用；分析了包皮来源的真皮干细胞条件培养基促进促进糖尿病创面愈合的具体机制。

实现上述目的的技术方案是：一种联合利用hFDSPCs-CM和HA促进糖尿病创面愈合的方法，包括以下步骤：

S1，细胞获取与培养，具体包括以下工序：

(1)hADSCs的提取：用胶原酶消化法消化抽脂术后废弃的颗粒脂肪，提取脂肪干细胞，长满后传代，第0～3代细胞用于实验；