[发明专利]一种抗非洲猪瘟病毒的融合蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种抗非洲猪瘟病毒的融合蛋白及其制备方法和应用，属于基因工程技术领域，所述抗非洲猪瘟病毒的融合蛋白，包括结构保护性肽DNBLK1和活性蛋白，所述结构保护性肽DNBLK1和活性蛋白通过连接肽连接；所述活性蛋白为猪自身免疫调节剂蛋白INF‑γ或抗病毒多肽IFN‑α；其中猪自身免疫调节剂蛋白能够在病毒侵染的第一时间激活猪体内免疫系统，激活抗病毒反应；抗病毒多肽直接作用于病毒，抑制病毒在体内的复制，破坏病毒结构；二者协同作用，实现非洲猪瘟预防与治疗。本发明提供的预防和/或治疗非洲猪瘟病的药物具有广谱抗病功能，残留小、无污染、无耐药性、无药物残留等优点，在病毒感染早期使用，防控效果显著。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种抗非洲猪瘟病毒的融合蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

非洲猪瘟病毒(ASFV)属于非洲猪瘟病毒科，非洲猪瘟病毒属，双链DNA病毒。它是目前唯一的DNA虫媒病毒。至今还没有发现与ASFV血清学相关的病毒。ASFV是一个很复杂的病毒，已被鉴定的结构蛋白有28种，编码的200多种蛋白中，有超过一半功能至今未知，在被感染的巨噬细胞中，已被鉴定出100种以上的病毒诱导蛋白，其中至少50种能与感染猪或康复猪的血清反应，40种能与病毒粒子相结合。ASFV至少有8个血清型，抗原易变异，不产生典型中和抗体，这些都是非洲猪瘟病毒有效疫苗面世的障碍。ASFV对热、腐败、干燥的抵抗力较强。病毒可在56℃的环境下存活2小时、4℃下存活6个月、在干燥的室温环境下可存活2年，而在-20℃下几乎可无限期的存活。在pH值范围为3至10的环境下，病毒十分稳定。且目前对于病毒的免疫保护机制不清楚，ASFV对通过免疫逃逸逃避宿主免疫防御系统，这些都是疫苗的研制待攻克的难题。

基因缺失疫苗、减毒活疫苗是目前疫苗研发的主要方向，但存在安全隐患，且在后续应用上存在一定问题，比如：疫苗免疫与野毒感染的诊断方法的建立，病毒变异甚至恢复毒力，要确保疫苗毒株的安全性、遗传稳定性、免疫原性，基因缺失疫苗及减毒活疫苗需要严格评估程序。

在养殖业中滥用兽药的现象普遍存在，在我国情况尤为严重。滥用兽药的直接后果是导致兽药在动物性食品中的残留，摄入人体后，影响人类的健康。兽药残留已逐渐成为人们普遍关注的一个社会热点问题。药物残留不仅可以直接对人体产生急慢性毒性作用，引起细菌耐药性的增加，还可以通过环境和食物链的作用间接对人体健康造成潜在危害。而且兽药残留还影响我国养殖业的发展和走向国际市场。细菌对抗生素的耐药率逐年上升，居高不下，而且耐药菌产生之快、传播之迅速、耐药率与耐药水平之高是以前少有的，这样的情况下，就需要使用一些低残留、不产生耐受性的治疗药物。而病毒类流行病的爆发，类似于非洲猪瘟、蓝耳病等，更是抗生素类兽药无法企及治愈控制的。

而蛋白质类药物在使用上存在刺激机体免疫原性，易被循环系统蛋白酶等代谢清除，定位给药困难，性质不稳定，容易高温变性，价格昂贵等应用问题，特别是难以口服应用，口服后经口腔消化系统后，易被胃蛋白酶、胰蛋白酶酶等消化道酶消化降解，丧失活性功能，无法进入血液循环系统，发挥药效。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗非洲猪瘟病毒的融合蛋白及其制备方法和应用；所述抗非洲猪瘟病毒的融合蛋白包括结构保护性肽DNBLK1和活性蛋白，所述活性蛋白包括猪自身免疫调节剂蛋白IFN-γ或抗病毒多肽IFN-α；其中猪自身免疫调节剂蛋白能够在病毒侵染的第一时间激活猪体内免疫系统，激活抗病毒反应，为猪自身对抗外来病毒入侵做好应对准备，杀灭病毒；抗病毒多肽直接作用于病毒，抑制病毒在体内的复制，破坏病毒结构；二者协同作用，实现非洲猪瘟预防与治疗。二者皆为蛋白类物质，与猪体内天然抗病毒蛋白结构一致，联合使用具有广谱抗病功能，残留小、无污染、无耐药性、无药物残留等优点，在病毒感染早期使用，防控效果显著。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：